【摘 要】
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以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆得到其丙酮酸脱氢酶基因(pdc)同源下游p3片段,并连接到广谱宿主载体pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL中构建了重
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院工业微生物教育部暨天津市重点实验室; 天津市药品检验所; 中法合营王朝葡萄酿酒有限公司; 天津科技大学后勤服务集团;
【基金项目】
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国家“973”项目(2007CB714305,2011CB707401);国家“863”项目(2008AA10Z336);科技部国际合作计划(2007DFB31620);天津市自然科学基金重点项目(08JCZDJC15100)
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以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆得到其丙酮酸脱氢酶基因(pdc)同源下游p3片段,并连接到广谱宿主载体pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL中构建了重组质粒pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL-p3,将此重组质粒转化到受体菌Z mobilis CP4中,分别以Ppdc和p3片段作为同源上游和下游片段,利用同源双交换重组技术将重组质粒中的ldhL基因置换了Z.mobilis染色体中的pdc基因,得到重组菌株Z.mobilis CP4(△pdc::ldhL)。测得重组菌株乳酸产量为10.8g/L,明显高于出发菌株,说明初步成功构建了产L-乳酸的运动发酵单胞菌代谢工程菌株。
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