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目的
探讨ASIC1a参与小脑普肯耶细胞发育的机制。
方法取C57BL/6初生小鼠，通过体外培养得到小脑普肯耶细胞。将原代小脑普肯耶细胞分为实验组和对照组，分别在细胞发育早期阶段及晚期阶段处理，其中实验组用shRNA-ASIC1a序列重组质粒慢病毒感染以下调ASIC1a表达，对照组用shRNA-对照序列重组质粒慢病毒感染。采用免疫荧光染色观察早期阶段和晚期阶段实验组、对照组小脑普肯耶细胞的形态学结构并计数树突分支；采用Western blotting检测小脑普肯耶细胞中钙结合蛋白D-28K、胶质纤维酸性蛋白、Zic、小清蛋白以及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)的表达；采用RT-PCR检测小脑普肯耶细胞中内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的表达。
结果免疫荧光染色检测发现：在早期阶段和晚期阶段，实验组、对照组小脑普肯耶细胞形态学差异明显，对照组小脑普肯耶细胞的树突生长发育较实验组好；实验组小脑普肯耶细胞的二、三级树突分支数目较对照组明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测发现：在早期阶段，只有普肯野细胞特异性蛋白钙结合蛋白D-28K表达在实验组中较对照组明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。在早期阶段和晚期阶段，ASIC1a表达下调后，实验组NMDAR表达较对照组明显上调，差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果发现：在早期阶段和晚期阶段，实验组内质网应激相关因子CHOP、PERK表达均较对照组明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论ASIC1a在小脑普肯耶细胞发育机制中发挥着重要作用。