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目的探索微血管内皮细胞(MECs)对造血干细胞(HSCs)增殖的影响,以建立一种促进HSCs增殖的方法。方法选取C57BL/6小鼠和C57系GFP小鼠,处死获取肺叶组织。(1)MECs的分离、培养和鉴定:肺组织经Ⅰ型胶原酶消化获得的细胞在含20%胎牛血清(FBS)、2ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)、100U/mL肝素、0.1mg/mL青霉素及链霉素的DMEM-F12培养基培养,第8天进行CD31荧光鉴定,"铺路石"细胞用于共培养并以流式细胞仪(FCM)检测八因子相关抗原(vWF)、CD31、CD34、CD45表达率。(2)GFP小鼠HSCs的分离、鉴定:密度梯度离心法和MACs-CD117+磁珠法分选HSCs,FCM检测纯度及CD117CD34共表达率。(3)MECs促HSCs增殖:设立对照组(HSCs)、共培养组(MECs+HSCs),培养7d,观察HSCs生长情况并计数、计算扩增倍数;第7天,收集共培养组HSCs,FCM检测CD117CD34共表达率。结果(1)肺MECs:第3天形成细胞簇,第6天成"血管样"改变,第14天为"铺路石"外观。培养第8天CD31阳性率为54.5%。vWF、CD31、CD34、CD45阳性率分别为81.39%、45.80%、57.48%、0.17%。(2)平均每只小鼠骨髓经MACs分选后可获约4.7×105个CD117+细胞,纯度为99.51%。(3)随着培养时间的延长,两组HSCs计数均有所增加,但共培养组HSCs扩增倍数大于对照组(P<0.05)。第1~7天共培养组与对照组细胞数相对变化倍数分别为1.21、1.35、1.50、1.72、1.71、1.75和1.78(P<0.05),第4天变化最明显。共培养7d后HSCs的CD117CD34共表达率为92.06%。结论 MECs对HSCs增殖有促进作用,共培养第4天促进作用最明显,并且MECs可以促进HSCs CD34的表达。