【摘 要】
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目的:观察β-淀粉样前体蛋白第二、三外显子编码结构域对培养的人神经纤维母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)生长代谢和β淀粉样蛋白(Aβ)分泌的影响.方法:利用重组DNA技术,构建pcDNA3
【机 构】
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北京大学精神卫生研究所,北京,100083北京回龙观医院;北京大学精神卫生研究所,北京,100083;北京回龙观医院;
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目的:观察β-淀粉样前体蛋白第二、三外显子编码结构域对培养的人神经纤维母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)生长代谢和β淀粉样蛋白(Aβ)分泌的影响.方法:利用重组DNA技术,构建pcDNA3.1APP695和删除第二、三外显子的pcDNA3.1ΔAPP695质粒,用脂质体转染法将其转入SH-SY5Y细胞系,用0.6 g*L-1 G418筛选获得稳定表达外源基因的细胞系,采用MTT法分析对细胞增殖的影响,用免疫沉淀Western blot 分析细胞培养液中Aβ的含量.结果:成功构建了APP695 cDNA和删除第二、三外显子的ΔAPP695 cDNA的真核表达载体,转染SH-SY5Y细胞系后,Western blot证实外源基因得到表达,MTT分析结果显示删除第二、三外显子的ΔAPP695 cDNA未对细胞产生明显的抑制增殖作用,免疫沉淀Western blot分析表明,与转染全长APP695 cDNA细胞相比,转染ΔAPP695 cDNA细胞Aβ分泌显著减少.结论:APP695第二、三外显子编码结构域删除后抑制了Aβ的生成,对探讨Aβ分子前体水解加工生成Aβ的关系有重要意义.
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