大鼠GAD65基因的克隆与原核表达

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目的 构建pGEX-6P-3/GAD65原核表达载体,获得大量纯化的大鼠GAD65蛋白。方法 通过RT-PCR技术从大鼠脑组织中扩增GAD65cDNA,克隆至PGEM-Tcasy载体上并测序,利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将GAD65基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定。IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharoae4B亲和层析柱对表达产物进行纯化。PreSciaaionProteas酶对融合蛋
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