【摘 要】
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目的 构建带有绿色荧光蛋白的人类前列腺凋亡反应因子4(Par-4)基因真核表达载体pIRES2-EGFP/Par-4,并转染K562细胞.方法 以pDNR/Par-4质粒为模板,PCR扩增Par-4基因,T-A克隆,
【机 构】
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山西省人民医院内分泌科,山西医科大学第二医院血液病研究所,山西医科大学血管外科
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目的 构建带有绿色荧光蛋白的人类前列腺凋亡反应因子4(Par-4)基因真核表达载体pIRES2-EGFP/Par-4,并转染K562细胞.方法 以pDNR/Par-4质粒为模板,PCR扩增Par-4基因,T-A克隆,亚克隆至pIRES2-EGFP上,并对重组表达载体进行酶切、测序鉴定.采用Superfect转染试剂转染K562细胞.提取细胞总蛋白,Western blotting柃测Par-4表达.结果 经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP/Par-4载体序列止确;荧光显微镜下可见转染的K562细胞有绿色荧光蛋白的表达,Western blotting 证实转染细胞中存在Par-4蛋白的表达.结论 pIRES2-EGFP/Par-4表达载体构建成功,并在K562细胞内成功表达.
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