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【摘要】目的:分析探讨血型鉴定的影响因素。方法:对676例孕妇采用玻片法和试管法进行血型鉴定。结果:玻片法和试管法存在结果不符现象,其准确率低于试管法。结论:血型鉴定存在一定的影响因素,血型鉴定时,需要综合考虑进行结果判断。
【关键词】盐水凝集法;ABO血型鉴定;影响因素
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2014)12-0301-02
血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状,ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统,在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。ABO血型鉴定,即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型,含B抗原的叫B型,含A和B抗原的叫AB型;不含A、B抗原,而含H抗原的称O型。血型鉴定是临床输血的首要问题,正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。盐水凝集法是临床最常用的血型鉴定方法,方法简单,操作方便,又经济实惠。其分为玻片法和试管法,结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。通过对676名孕妇的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析,探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
1对象、材料和方法
1.1对象 2014年1月 2014年8月间676名来做孕检的孕妇,年龄18~40岁,平均年龄28岁。每人抽取EDTA抗凝血,在30分钟内完成ABO血型鉴定操作。
1.2材料
1.2.1离心机、恒温水浴箱、生理盐水、专用玻璃蜡笔、一次性使用滴管、清洁干燥的玻片和试管。
1.2.2抗A、抗B血型试剂(单克隆抗体);北京金豪制药股份有限公司提供。
1. 3方法
1.3.1 玻片法:取清洁玻片1张,用蜡笔划成方格并注明抗A、抗B字样。分别用滴管滴加抗A、抗B标准血清各1滴玻片上抗A、抗B处,再各加受检者血样(5%红细胞悬液或全血)1滴,不断轻轻转动,使标准血清与受检者红细胞悬液充分混匀,连续1-5min,肉眼观察有无凝集(或溶血)反应,必要时可用低倍镜观察结果。
1.3.2试管法:取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支,分别标明抗A、抗B字样,分别加入抗A、抗B标准血清各1滴,于相应标记的试管;然后分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀;以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。
结果判断:凝集判断标准红细胞均匀分布,无凝集颗粒,显微镜下红细胞分散存在,无凝集靠拢现象为阴性,红细胞出现凝集为阳性。
2 结果
2.1 玻片法和试管法的血型鉴定结果见下表:
方法 总人数 O型(人) A型(人) B型(人) AB型(人) 备注
玻片法 676 282 159 183 52
试管法 676 280 160 184 52
全部数据采用SPSS1 1.5统计软件包处理, P<9.05有差异,有统计学意义。从表中可以看出不论是玻片法还是试管法,676名孕妇的血型分布是一致的,即O型最多,之后依次为B、A、AB,即O>B>A>AB。
2.2 玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同,而A型、B型和O型人数不完全一致,存在一定的差异,具体数据上表。
3 讨论
血型由血型基因决定,是血细胞的主要特征之一, 在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。输血安全是临床输血的首要问题,正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。
3.1 医务人员的问题
3.1.1临床医生在填写输血申请时,没有做血型检测,单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误。
3.1.2临床护士在抽取血标本时,未校对患者的姓名、床号,仅凭印象,抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合。
3.1.3检验科人员没有对报告核对正确,造成血型鉴定错误。
3.2 被检红细胞
3.2.1血型测定的错误:检测时,因患者红细胞悬液浓度过低,又只用肉眼观察结果,使之在血型抗原较弱的情况下,微弱、细小的凝集未看到,而造成定型报告错误。
3.2.2 标本新鲜,严防污染。细菌污染的标本,红细胞上T抗原被激活,与标准血清中的抗T抗体结合,出现全凝集现象,干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集,可加做自身血清和红细胞,自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时,可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。
3.2.3 冷凝集素属于冷反应性的自身抗体,4℃ 条件下,正常人血清中的冷凝集素效价低于1:16,冷凝集素效价增高是导致献血者血型定型不符的常见因素 。在较低温度条件下,冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象,凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37℃不能凝集标准RBC和自身RBC,因此不会造成血型误判,但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集,容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素,在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞,以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中,冷凝集素很高,严重干扰血型鉴定。
3.2.4 ABO亚型在血型血清学试验中是导致定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原,是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A,和A ,其他A亚型不多见,而B亚型通常比A亚型更少。
3.2.5 ABO血型抗体减弱:ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成血型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱,可以通过增加血清用量,降低反应温度,延长反应时间,应用低离子强度溶液等方法,检出低效价的抗一A和抗一B。 3.3 实验器材
3.3.1所用器材必须清洁、干燥,试管、滴管要专用,标记清楚。3.3.2红细胞浓度按要求配制,红细胞与相应抗体的比例适当。
3.3.3反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素,要按操作规程严格控制。
3.4 其它因素
3.4.1经输血或妊娠等免疫刺激产生,在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中,不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应,导致ABO血型鉴定结果不符。
3.4.2类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人,红细胞获得了类B抗原,A型病人可误定为AB型,O型误定为B型。因此,感染体征病人配血不合时,应考虑类B。
3.4.3磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺,3个月后,其血清能凝集A、AB型的红细胞,也能凝集B型的红细胞。另外,注射青霉素后,有些人的血清中含有青霉素抗体,而青霉素已吸附在红细胞表面,当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
总之,在ABO血型鉴定试验中,影响因素较多,如果出现血型鉴定结果不符,不能轻易发报告,否则,可致ABO血型的误判,引发不良后果。因此,在具备认真的工作态度的基础上,还需要不断积累丰富的血型鉴定经验,对异常结果进行系统全面地分析,查明原因,以获得ABO血型的准确定型,确保安全输血。
参考文献:
[1]张悦,袁丽杰.构建医学检验专业技能培训体系的规划与设计思路[q].现代生物医学进展,2006,6(9):127.
[2]王莉,田素莹.在临床实践教学中培养医学生人文执业素质[J].中国医疗前沿,2007,2(13):41.
[3]尚晓斌,黄昌杰,莫诚航,等.对医学实习生进行内科临床实践能力培养的教学体会[J].广西医科大学学报,2008,25(10):235236.
[4]《中国药典》三部,2010版
[5]《体外诊断试剂说明书编写指导原则》,国家食品药品监督管理局(2007-04-28)
[6]叶应妩,王毓三,申子瑜,等.全国临床检验操作规程/中中华人民共和国医政司.—3版.—南京:东南大学出版社,2006.10ISBN7—5641—6
【关键词】盐水凝集法;ABO血型鉴定;影响因素
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2014)12-0301-02
血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状,ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统,在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。ABO血型鉴定,即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型,含B抗原的叫B型,含A和B抗原的叫AB型;不含A、B抗原,而含H抗原的称O型。血型鉴定是临床输血的首要问题,正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。盐水凝集法是临床最常用的血型鉴定方法,方法简单,操作方便,又经济实惠。其分为玻片法和试管法,结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。通过对676名孕妇的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析,探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
1对象、材料和方法
1.1对象 2014年1月 2014年8月间676名来做孕检的孕妇,年龄18~40岁,平均年龄28岁。每人抽取EDTA抗凝血,在30分钟内完成ABO血型鉴定操作。
1.2材料
1.2.1离心机、恒温水浴箱、生理盐水、专用玻璃蜡笔、一次性使用滴管、清洁干燥的玻片和试管。
1.2.2抗A、抗B血型试剂(单克隆抗体);北京金豪制药股份有限公司提供。
1. 3方法
1.3.1 玻片法:取清洁玻片1张,用蜡笔划成方格并注明抗A、抗B字样。分别用滴管滴加抗A、抗B标准血清各1滴玻片上抗A、抗B处,再各加受检者血样(5%红细胞悬液或全血)1滴,不断轻轻转动,使标准血清与受检者红细胞悬液充分混匀,连续1-5min,肉眼观察有无凝集(或溶血)反应,必要时可用低倍镜观察结果。
1.3.2试管法:取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支,分别标明抗A、抗B字样,分别加入抗A、抗B标准血清各1滴,于相应标记的试管;然后分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀;以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。
结果判断:凝集判断标准红细胞均匀分布,无凝集颗粒,显微镜下红细胞分散存在,无凝集靠拢现象为阴性,红细胞出现凝集为阳性。
2 结果
2.1 玻片法和试管法的血型鉴定结果见下表:
方法 总人数 O型(人) A型(人) B型(人) AB型(人) 备注
玻片法 676 282 159 183 52
试管法 676 280 160 184 52
全部数据采用SPSS1 1.5统计软件包处理, P<9.05有差异,有统计学意义。从表中可以看出不论是玻片法还是试管法,676名孕妇的血型分布是一致的,即O型最多,之后依次为B、A、AB,即O>B>A>AB。
2.2 玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同,而A型、B型和O型人数不完全一致,存在一定的差异,具体数据上表。
3 讨论
血型由血型基因决定,是血细胞的主要特征之一, 在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。输血安全是临床输血的首要问题,正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。
3.1 医务人员的问题
3.1.1临床医生在填写输血申请时,没有做血型检测,单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误。
3.1.2临床护士在抽取血标本时,未校对患者的姓名、床号,仅凭印象,抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合。
3.1.3检验科人员没有对报告核对正确,造成血型鉴定错误。
3.2 被检红细胞
3.2.1血型测定的错误:检测时,因患者红细胞悬液浓度过低,又只用肉眼观察结果,使之在血型抗原较弱的情况下,微弱、细小的凝集未看到,而造成定型报告错误。
3.2.2 标本新鲜,严防污染。细菌污染的标本,红细胞上T抗原被激活,与标准血清中的抗T抗体结合,出现全凝集现象,干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集,可加做自身血清和红细胞,自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时,可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。
3.2.3 冷凝集素属于冷反应性的自身抗体,4℃ 条件下,正常人血清中的冷凝集素效价低于1:16,冷凝集素效价增高是导致献血者血型定型不符的常见因素 。在较低温度条件下,冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象,凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37℃不能凝集标准RBC和自身RBC,因此不会造成血型误判,但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集,容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素,在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞,以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中,冷凝集素很高,严重干扰血型鉴定。
3.2.4 ABO亚型在血型血清学试验中是导致定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原,是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A,和A ,其他A亚型不多见,而B亚型通常比A亚型更少。
3.2.5 ABO血型抗体减弱:ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成血型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱,可以通过增加血清用量,降低反应温度,延长反应时间,应用低离子强度溶液等方法,检出低效价的抗一A和抗一B。 3.3 实验器材
3.3.1所用器材必须清洁、干燥,试管、滴管要专用,标记清楚。3.3.2红细胞浓度按要求配制,红细胞与相应抗体的比例适当。
3.3.3反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素,要按操作规程严格控制。
3.4 其它因素
3.4.1经输血或妊娠等免疫刺激产生,在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中,不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应,导致ABO血型鉴定结果不符。
3.4.2类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人,红细胞获得了类B抗原,A型病人可误定为AB型,O型误定为B型。因此,感染体征病人配血不合时,应考虑类B。
3.4.3磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺,3个月后,其血清能凝集A、AB型的红细胞,也能凝集B型的红细胞。另外,注射青霉素后,有些人的血清中含有青霉素抗体,而青霉素已吸附在红细胞表面,当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
总之,在ABO血型鉴定试验中,影响因素较多,如果出现血型鉴定结果不符,不能轻易发报告,否则,可致ABO血型的误判,引发不良后果。因此,在具备认真的工作态度的基础上,还需要不断积累丰富的血型鉴定经验,对异常结果进行系统全面地分析,查明原因,以获得ABO血型的准确定型,确保安全输血。
参考文献:
[1]张悦,袁丽杰.构建医学检验专业技能培训体系的规划与设计思路[q].现代生物医学进展,2006,6(9):127.
[2]王莉,田素莹.在临床实践教学中培养医学生人文执业素质[J].中国医疗前沿,2007,2(13):41.
[3]尚晓斌,黄昌杰,莫诚航,等.对医学实习生进行内科临床实践能力培养的教学体会[J].广西医科大学学报,2008,25(10):235236.
[4]《中国药典》三部,2010版
[5]《体外诊断试剂说明书编写指导原则》,国家食品药品监督管理局(2007-04-28)
[6]叶应妩,王毓三,申子瑜,等.全国临床检验操作规程/中中华人民共和国医政司.—3版.—南京:东南大学出版社,2006.10ISBN7—5641—6