本研究将经密码子优化的皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase)CRL1基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHKA,构建重组菌株GS115/pHKA-CRL1,经摇瓶发酵、甲醇诱导120 h,对底物对硝基苯酚丁酯(pNPB)的水解活力达到39.73 U/mL。通过对AOX1启动子和α分泌信号肽同时进行改造,获得重组菌株GS115/pHKA-AOX1m/αm-CRL1,脂肪酶活力提高60.18%,达到63.63U/mL。发酵液上清液经过超滤浓缩、硫酸铵沉淀后脱盐和阴离子交换层析,获得纯化后的重组CRL1:比酶活为984.52 U/mg,纯化倍数5.41倍,回收率33.81%。重组CRL1的最适温度为40℃,最适pH为7.5;经40℃保温6 h,仍保留52.99%的相对活力;在偏酸性环境中较为稳定。以摇瓶发酵、真空冷冻干燥后的重组CRL1为催化剂,在无溶剂体系中催化合成维生素E醋酸酯,最适反应条件为:200 mg D-α-生育酚、1 mL乙酸酐、100 mg CRL1、反应温度60℃、转速200 r/min、反应时间9 h,D-α-生育酚的转化率在97.00%以上,具有良好的工业化应用前景。