【摘 要】
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旨在制备高纯度水牛白细胞介素2(lnterleukin,IL-2)蛋白,为研发新型抗病毒药物奠定基础.通过刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)刺激水牛脾脏淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR扩增IL-2基因编码区序列,与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-IL-2,转入大肠埃希氏菌BL21中,用IPTG诱导目的蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析、纯化、Western blot鉴定及抗病毒活性评估.结果显示,水牛IL-2编码区序列全长468 bp,共
【机 构】
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广西兽医生物技术重点实验室,广西兽医研究所,广西南宁 530001
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旨在制备高纯度水牛白细胞介素2(lnterleukin,IL-2)蛋白,为研发新型抗病毒药物奠定基础.通过刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)刺激水牛脾脏淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR扩增IL-2基因编码区序列,与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-IL-2,转入大肠埃希氏菌BL21中,用IPTG诱导目的蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析、纯化、Western blot鉴定及抗病毒活性评估.结果显示,水牛IL-2编码区序列全长468 bp,共编码155个氨基酸.重组IL-2蛋白主要以可溶性形式表达,表达的IL-2蛋白能与His标记抗体和山羊IL-2多克隆抗体反应,且在牛肾细胞上能有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变,具有一定的抗病毒效果.结果表明,重组水牛IL-2蛋白在大肠埃希氏菌中表达量大、纯度高,反应性好,具有较强的抗病毒活性,可作为新型抗病毒药物的候选制品.
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