【摘 要】
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目的研究常用化疗药物对人乳腺癌细胞雌激素受体（estrogen receptor，ER）表达和甲基化的影响。方法采用剂量递增法，分别以紫杉醇（paclitaxel，PTX）和表柔比星（epirubicin，EPI）诱导>6个月，检测药物干预前后人乳腺癌细胞MCF-7（ER+，Luminal A）ER-α的表达和甲基化。用miRNA芯片筛选两种药物干预后MCF-7细胞中表达变化一致的miRNA，并以
【机 构】
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徐州医科大学临床学院，徐州市中心医院肿瘤内科 221009,徐州医科大学临床学院，徐州市中心医院肿瘤内科 221009,解放军武汉总医院门诊部，武汉 430070,徐州医科大学临床学院，徐州市中心医院
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目的研究常用化疗药物对人乳腺癌细胞雌激素受体（estrogen receptor，ER）表达和甲基化的影响。
方法采用剂量递增法，分别以紫杉醇（paclitaxel，PTX）和表柔比星（epirubicin，EPI）诱导>6个月，检测药物干预前后人乳腺癌细胞MCF-7（ER+，Luminal A）ER-α的表达和甲基化。用miRNA芯片筛选两种药物干预后MCF-7细胞中表达变化一致的miRNA，并以定量PCR（qPCR）验证。生物信息分析下调最显著的miRNA的靶点，将miRNA抑制剂（inhibitor）转染至MCF-7细胞，将miRNA模拟物（mimic）转染至MCF-7/PTX与MCF-7/EPI细胞，Western blot检测ER-α、DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）的表达情况，定量甲基化特异性PCR（qMSP）检测ER-α甲基化。
结果建立对PTX耐药的MCF-7/PTX细胞株，对EPI耐药的MCF-7/EPI细胞株。药物干预后，均引起ER-α蛋白表达下降、甲基化水平升高，伴随DNMT1和组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1，HDAC1）的表达上调，筛选出药物干预后MCF-7细胞中表达变化一致的miRNA，并经qPCR验证，其中下调最显著的是miR-148b。经生物信息学分析，通过荧光素酶报告基因实验（Luciferas）证实DNMT1是miR-148b的直接靶点。miR-148b inhibitor引起MCF-7细胞中ER-α表达降低、甲基化水平升高及DNMT1的表达增高；miR-148b mimic引起MCF-7/PTX与MCF-7/EPI细胞中ER-α表达升高、甲基化水平降低及DNMT1的表达降低。
结论化疗药物（以PTX和EPI为代表）诱导MCF-7细胞中miRNA表达紊乱，下调的miR-148b对DNMT1表达的抑制作用减弱，进而促使ER-α发生高甲基化，表达下调。
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