【摘 要】
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制备谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS)多克隆抗体,为下一步深入研究其结构与功能做准备。以Gln RS全长基因为模板,PCR获取编码Gln RS N端236个氨基酸的基因片段,将PCR产物插入p
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.81071306)资助
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制备谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS)多克隆抗体,为下一步深入研究其结构与功能做准备。以Gln RS全长基因为模板,PCR获取编码Gln RS N端236个氨基酸的基因片段,将PCR产物插入p ET28a以构建N(1-236)-Gln RS的重组表达载体(p ET28a-N-Gln RS),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达N-Gln RS重组蛋白,用镍柱对表达的蛋白进行纯化,将纯化的蛋白对BALB/c小鼠采取皮下注射制备多克隆抗体,离心取血清,最后对制备的抗体进行特异性检测。PCR获得了目的片段,成功构建表达载体,获得表达的Gln RS N端236个氨基酸重组蛋白,制备抗体具有很好的特异性,可用于Gln RS检测。以N-Gln RS重组蛋白为抗原制备的抗体对Gln RS具有很好的免疫特异性,为下一步在蛋白水平深入研究Gln RS的结构与功能提供了抗体准备。
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