在昆虫细胞中表达HSV糖蛋白单域抗体的重组杆状病毒的构建

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sjk
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设计一对含EcoRI-起始码和终止码-SalI的鼠抗体VH引物,用PCR法对重组质粒plA12VH中插入基因1A12VH进行突变,突变的PCR产物的序列测定表明,在1A12VH基因两端成功地插入了EcoRI-起始码和终止码-SalI。将突变后1A12VH依次克隆入pSL301质粒和pAcEEUL8质粒中,使1A12VH基因两端均接上BamHI接头,用BamHI酶切,将1A12VH基因克隆入杆状病毒表达载体pAcCL29质粒的多角体基因中的唯一BamHI切点处,经计算机分析,用BamHI;EcoRV/EcoRI;SalI三组酶切,筛选出克隆的1A12VH基因方向与多角体启动子基因方向一致的重组杆状病毒转基因质粒pAc1A12VH。CsCL-EB梯度平衡离心法纯化pAc1A12VH,转化AcNPV基因组DNA,然后转染的Sf9细胞,空斑筛选和纯化1A12VH-AcNPV重组杆状病毒,并用PCR法作进一步鉴定。

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