【摘 要】
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【目的】枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害，为害严重，建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）和烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）快速检测方法，为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持，保障烟草行业的稳定生产。【方法】以采集广西百色地区土传病害土壤与健康土壤为测试材料，以标准病原菌为参考
【基金项目】
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广西中烟工业有限公司项目（2020450000340022）；
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【目的】枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害，为害严重，建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）和烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）快速检测方法，为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持，保障烟草行业的稳定生产。【方法】以采集广西百色地区土传病害土壤与健康土壤为测试材料，以标准病原菌为参考模板建立标准曲线，利用尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的保守区域设计的引物，根据目标条带及荧光定量PCR（qPCR）的溶解曲线与循环阈值（Ct值）筛选出特异性引物；同时，改进土壤中微生物DNA试剂盒提取方法，建立PCR和qPCR检测体系。【结果】分别筛选出一对尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的特异性的引物Pn3和JBR，模板浓度在1×102～1×10-4 ng之间，具有良好的线性关系，两种病原菌的DNA数量在发病土壤高于健康土壤。风干土壤并研磨再加两次洗脱有助于提取土壤中病原菌的DNA，建立了以普通PCR预扩增反应得到的产物作为模板的qPCR检测方法。【结论】PCR和qPCR联用技术能快速地分辨和检测尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌，对枯萎病和烟草黑胫病实时监测和前期预警具有重要作用。
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