腹泻患儿粪便标本中腺病毒PCR检测方法的建立

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目的 建立一种从患腹泻婴幼儿粪便标本中腺病毒的方法.方法 设计出可同时鉴定腺病毒并判断是否属于F组(肠道腺病毒Ad40或Ad41)的2组引物,通过PCR检测50份腹泻患儿粪便标本,对鉴定为阳性标本的扩增产物进行测序,以验证腺病毒型别.同时用抗原检测的方法鉴定粪便标本中的腺病毒,并以此为金标准,评价PCR方法检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性.结果 腺病毒阳性的粪便标本通过PCR扩增可得到大小为301 bp的片段,如果属F组型别则还可同时扩增得到1条541 bp(Ad40)或586 bp(Ad41)的片段.PCR检测的50份粪便标本中有15份为腺病毒阳性,阳性率为30%其中8份属腺病毒F组.15份腺病毒阳性标本的PCR扩增产物经测序比对均属腺病毒,其中13份为F型别,2份为腺病毒7型.以测序结果为金标准,PCR检测F组腺病毒方法的特异度为100%,敏感度为61.6%,阳性预测值为100%,阴性预测值为71.4%,准确性为67.0%.与腺病毒抗原检测法(阳性率为22%)比较,PCR检测腺病毒的敏感度为45.5%,特异度为74.4%,阳性预测值为33.3%,阴性预测值为82.9%,准确性为68.0%.结论 成功建立PCR法可一次快速检出患儿粪便标本中的腺病毒,并区分F组和非F组型别,有望用于开展常规粪便标本腺病毒检测,并为肠道腺病毒流行病学的研究提供参考。

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