双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：tian_mizhen

【摘要】

：

利用pBudcE4．1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体，为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板，PCR扩增得到U6启动子，用其置换载体pBudcE4．1内的CMV启动子的

【作者】

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项海涛杨彬温峰琴胡永浩柳纪省

【机构】

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甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室

【出处】

：

生物技术通报

【发表日期】

：

2009年4期

【关键词】

：

RNAi 共表达载体 U6启动子构建鉴定

【基金项目】

：

国家“973”前期专项(2004CCA00500);国家“863”项目(2006AA10A204)

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利用pBudcE4．1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体，为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板，PCR扩增得到U6启动子，用其置换载体pBudcE4．1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体。用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达。经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4．1-U6。用干扰载体pBudcE4．1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后，荧光显微镜观察显

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