【摘 要】
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目的研究NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期、胶原合成和迁移的影响,探讨NGF在创伤修复中的作用。方法采用酶消化法体外分离培养人真皮成纤维细胞,取第3代细胞进行实验。
【机 构】
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四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室,
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目的研究NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期、胶原合成和迁移的影响,探讨NGF在创伤修复中的作用。方法采用酶消化法体外分离培养人真皮成纤维细胞,取第3代细胞进行实验。分别加入0、25、50、100、200、400ng/mLNGF,培养48h采用MTT法检测细胞增殖;加入0、100ng/mLNGF,培养48h采用流式细胞仪分析细胞有丝分裂周期,采用羟脯氨酸法检测培养液胶原含量,实时荧光定量PCR测定细胞ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平;建立体外细胞划痕创伤模型,加入0、50、100、200ng/mLNGF,培养24h观察细胞迁移。结果MTT法检测结果显示,各浓度组间细胞增殖的吸光度值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在0、100ng/mLNGF作用下,细胞周期显示两组的G0/G1期、S期、G2/M期细胞百分率差异均无统计学意义(P>0.05),羟脯氨酸法测得两组细胞培养液胶原含量和实时荧光定量PCR测定细胞ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验结果显示,培养24h后0、50、100、200ng/mLNGF浓度组细胞迁移率分别为52.12%±6.50%、80.67%±8.51%、66.33%±3.58%和61.19%±0.97%,50、100ng/mLNGF可显著促进细胞迁移(P<0.05)。结论NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期及ColⅠ、ColⅢmRNA表达无影响,不能促进胶原合成,但能促进人真皮成纤维细胞迁移。
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