【摘 要】
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[目的]检测不同克隆方法所获得的转基因绵羊的外源基因及其启动子的甲基化水平,以及蛋白表达的差异.[方法]通过体细胞克隆、干细胞克隆和卵周隙内注射法将外源基因增强型绿色
【机 构】
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新疆畜牧科学院绵羊中心,新疆乌鲁木齐830000;新疆农业大学,新疆乌鲁木齐830000;新疆畜牧科学院绵羊中心,新疆乌鲁木齐,830000;
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[目的]检测不同克隆方法所获得的转基因绵羊的外源基因及其启动子的甲基化水平,以及蛋白表达的差异.[方法]通过体细胞克隆、干细胞克隆和卵周隙内注射法将外源基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和成纤维细胞内生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)分别导入绵羊体内,获得转基因绵羊,以CMV为启动子,利用完全重亚硫酸盐沉淀测序法检测绵羊尾部组织外源基因启动子及编码区甲基化状态,West blot检测外源基因的蛋白表达水平.[结果]启动子区的甲基化水平最高的是干细胞克隆,其次是体细胞克隆,卵周隙注射最低；eGFP编码区的甲基化水平以卵周隙注射最高,其次是干细胞克隆；FGF5编码区甲基化水平体细胞克隆高于卵周隙注射法.外源基因蛋白的表达量同其启动子区域的甲基化水平呈负相关关系.[结论]该研究结果提示不同的克隆方法可能会影响外源基因的甲基化水平,从而影响到外源基因的表达.
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