【摘 要】
：
目的 构建、包装并鉴定携带红色荧光蛋白(DsRed)标记的蛋白激酶B(akt1)的慢病毒.方法 通过逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)扩增1488 kb mouse akt1基因片段,通过TA克隆将akt1接
【机 构】
：
徐州医学院附属医院心脏与血管综合实验室,徐州医学院心血管病研究所分子生物学实验室
论文部分内容阅读
目的 构建、包装并鉴定携带红色荧光蛋白(DsRed)标记的蛋白激酶B(akt1)的慢病毒.方法 通过逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)扩增1488 kb mouse akt1基因片段,通过TA克隆将akt1接入T载体,然后和IRES-dsred、pXZ208连接.酶切、测序鉴定正确的重组体(pXZ208-akt1-IRES-dsred).三质粒系统经磷酸钙法包装病毒,荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)检测病毒滴度.Western blot比较病毒感染组与未感染组AKT1蛋白表达.pXZ208-akt1-IRES-dsred慢病毒和绿色荧光蛋白标记(GFP)的慢病毒共感染真核细胞,荧光显微镜观察两者的表达.结果 经鉴定转移质粒构建正确,荧光显微镜观察293FT表达DsRed,FACS测得病毒滴度为(1.245±0.250)×107/ml.Western blot证实病毒感染组与未感染组比较AKT1蛋白表达增高(P＜0.05).与GFP标记的慢病毒共感染真核细胞,荧光显微镜观察到共同表达DsRed和GFP.结论 DsRed标记akt1慢病毒构建和表达成功.DsRed和GFP标记慢病毒共感染真核细胞可观察到表达两种荧光蛋白.
其他文献
长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase, L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异
基于我国高校实验教学现况,阐述对本科专业实验课进行研究性教学改革的必要性和可行性。在论述研究性教学的特征及其在实验教学中优越性基础上,结合安全工程专业的《安全检测
为比较研究富硒益生菌( selenium-enriched probiotics,SP)和亚硒酸钠(sodium selenite,ss)对鸡产蛋性能和肝脏I型脱碘酶(IDI)活性以及血清T3和T4水平的影响,将2种硒源分别以
目的 分析胰腺中段切除术对胰瘘发生的影响,并总结胰腺残端处理经验.方法 对2003年4月至2009年12月共40例行胰腺中段切除术的胰腺肿瘤患者资料进行回顾性分析,其中良性肿瘤36
采用悬浮填料生物接触氧化法对福州市东南区水厂的微污染原水进行预处理,考察了该工艺的处理效果及影响因素,并针对原水中污染物的周期性变化规律,提出了可行的工艺设计参数和建议。结果表明,当原水的氨氮和CODMn分别为(0.15~2.0)、(2~4.1)mg/L时,在HRT为1 h、气水比为1∶1的工况下,生物接触氧化工艺对氨氮和CODMn的去除效果较好,平均去除率分别可达70%以上和15%左右。随HRT
以玉米杂交种郑单958为材料,研究缩节安(DPC)拌种对玉米幼苗形态和抗旱性的影响.结果表明,与对照相比,播种前以种子∶水∶缩节安∶羧甲基纤维素=20∶ 1∶0.05∶0.02(重量比)
目的:采用薄层扫描法测定广西匙羹藤Gymnema sylvestre(Retz.)Schult中牛弥菜醇A的含量。方法:使用硅胶H板,展开剂为苯-乙酸乙酯-甲醇(10∶3∶5),5%香草醛硫酸溶液显色,于105
通过卫星推送的视频点播(SPVoD)系统的网络体系的介绍,分析了SPVoD前端系统结构的设计.提出了一种适合于SPVoD前端系统结构的内容管理系统的设计方案,对内容管理系统的总体设
由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV的方法,通过利用无