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目的 观察针对HBV C区双位点核酶在细胞内阻断C区基因表达的作用。方法 采用亚克隆技术，从pGEM-核酶（Rz）123（含针对HBV C区2029～2031及2063～2065双位点核酶）上切下双位点核酶的片段，定向克隆于真核表达载体pBBS212中，利用脂质体介导，将重组质粒pBBS212-Rz与p1.2Ⅱ（含乙型肝炎病毒全序列）共转染入人肝癌细胞（HHCC）中，采用原位杂交观察核酶的表达，ELISA、免疫荧光、激光共聚焦、免疫组化及图像分析法分析HBeAg/HBcAg及HBsAg的表达。结果 共转染HHCC后第5天上清中测到HBsAg，第7天测到HBeAg，筛选后达高峰，上清中HBsAg1∶100阳性，胞浆裂解液中HBcAg1∶4阳性，且可稳定表达2个月以上。共转染HHCC经潮霉素B筛选2周后，原位杂交证明可表达针对HBV C区双位点核酶。ELISA方法检测发现，核酶抑制HBeAg表达50％～65％，用免疫荧光、激光共聚焦分析，免疫组化等均证实核酶可抑制HBV细胞内的表达。结论 该双位点核酶通过针对HBV C区基因的剪切作用，阻断C区基因表达，抑制了HBeAg/HBcAg的合成。