【摘 要】
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目的:从临床乳腺癌组织中扩增肿瘤相关抗原Trop-2胞外肽段基因,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对该蛋白的生物学特性进行鉴定。方法:RT-PCR扩增Trop-2胞外肽段基因并克隆于pMD1
【机 构】
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南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室; 南京医科大学附属南京市妇幼保健院; 南京军区军事医学研究所;
【基金项目】
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南京市医学科技发展项目(ZKX09015);南京市科技发展项目(200901083)
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目的:从临床乳腺癌组织中扩增肿瘤相关抗原Trop-2胞外肽段基因,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对该蛋白的生物学特性进行鉴定。方法:RT-PCR扩增Trop-2胞外肽段基因并克隆于pMD18-T载体中进行测序分析,用NcoⅠ和EcoRⅠ将含Trop-2胞外区重组基因的质粒双酶切后,克隆到pBAD-gⅢ中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌TOP10,以L-阿拉伯糖诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经后His柱亲和层析纯化后,用Western blot、ELISA检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot显示,表达的重组蛋白分子质量约为38ku,此抗原能够与商业化抗体特异性结合。结论:成功制备Trop-2胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的Trop-2胞外肽段保持了原有的抗原性。
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