【摘 要】
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目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的方法对重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的N-寡糖进行快速分析。方法:以N-糖苷酶酶切rhEPO样
【基金项目】
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国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2015ZX09501008-001)
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目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的方法对重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的N-寡糖进行快速分析。方法:以N-糖苷酶酶切rhEPO样品,采用磁珠辅助法收集酶切下来的N-寡糖,以APTS对酶切下来的N-寡糖进行荧光标记,利用CE-LIF实现分离检测,通过GU数据库进行糖型鉴定。CE-LIF条件:采用未涂层熔融石英毛细管(有效长度20 cm,总长度30 cm,内径50μm),电迁移进样,电压设为-2 kV,进样时间2 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-30 kV,分离时间5.5 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法在60 min内完成样品前处理,5 min内完成分离分析检测;FA2BG2S2、FA2(3)G1S1和A2B3个峰的迁移时间的RSD均小于0.2%,校正峰面积百分比RSD均小于2.6%(n=5)。结论:本研究建立的CE-LIF快速糖分析法高效快速,重复性好,可对糖型进行实时鉴定,适用于rhEPO制品的N-寡糖分析。
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