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根据非洲猪瘟病毒（ASFV）保守的VP72基因序列，设计特异性引物和探针，经过优化反应体系中各组分及反应条件，建立了直接检测样品中ASFV的荧光定量PCR方法，并分析该方法的特异性和敏感性。结果显示，该直扩荧光定量PCR方法只对ASFV有特异性扩增，对其他几种相似疾病病原的灭活抗原，如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、口蹄疫病毒、印第安纳型水泡性口炎病毒、新泽西型水泡性口炎病毒、猪流行性腹泻病毒等，检测均呈阴性。敏感性试验结果显示，对10倍梯度稀释的非洲猪瘟病毒灭活抗原的检测敏感性可达1×10-6，与OIE推荐的传统的荧光PCR的检测敏感性相当。3个ASFV稀释度样品的组内和组间重复的变异系数均小于5%。该方法无须提取核酸，可在60 min内完成对样品的检测，检测快速、灵敏，结果准确，结合便携式荧光PCR仪，为野外或现场的非洲猪瘟病毒快速检测提供了一种切实可行的方法。