【摘 要】
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目的寻找一种可以快速获得大量猫原代角膜内皮细胞的方法。方法揭取猫角膜后弹力层,反复剪碎,用2g·L-1复合胶原酶消化40min,再用2.5g·L-1胰蛋白酶-EDTA消化2min,离心、细胞
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科
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目的寻找一种可以快速获得大量猫原代角膜内皮细胞的方法。方法揭取猫角膜后弹力层,反复剪碎,用2g·L-1复合胶原酶消化40min,再用2.5g·L-1胰蛋白酶-EDTA消化2min,离心、细胞计数后以50×106L-1的浓度接种。待细胞长满皿底后传代,接种浓度同原代培养。记录细胞的形态以及原代细胞的数目、原代细胞铺满皿底的时间、细胞传代时间和传代次数,并与组织块贴壁法和揭膜消化法相比较。结果联合酶消化法获得的原代细胞可以形成典型的铺路石样结构,无基质细胞污染,每片角膜可以收获(100~200)×103个细胞,只需5d就可以首次传代,传代后4d即可达到80%融合,连续传代8次仍可以维持小多边形的形态。结论胶原酶和胰蛋白酶联合消化法可以快速获得大量的猫角膜内皮细胞。
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