【摘 要】
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目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)降低脂肪肝细胞脂肪含量的DNA甲基化调控机制,为应用EG CG防治脂肪肝提供实验依据.方法 利用游离脂肪酸棕榈酸处理大鼠正常肝细胞株BRL,建立大鼠脂肪肝细胞模型.用EGCG干预细胞72 h,检测处理前后脂肪肝细胞的脂肪含量及葡萄糖消耗量,用实时PCR方法检测EGCG作用前后DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的转录水平.结果 浓度
【机 构】
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海军机关门诊部内二科,北京,100841;
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目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)降低脂肪肝细胞脂肪含量的DNA甲基化调控机制,为应用EG CG防治脂肪肝提供实验依据.方法 利用游离脂肪酸棕榈酸处理大鼠正常肝细胞株BRL,建立大鼠脂肪肝细胞模型.用EGCG干预细胞72 h,检测处理前后脂肪肝细胞的脂肪含量及葡萄糖消耗量,用实时PCR方法检测EGCG作用前后DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的转录水平.结果 浓度为0.1 mmol/L的棕榈酸处理大鼠肝细胞BRL后,细胞的脂肪含量明显增加,吸光度(A)值从(0.22±0.04)增加到(0.31±0.06),差异具有统计学意义(P＜0.05),葡萄糖消耗量从(2.09±0.09)下降到(0.77±0.04),差异具有统计学意义(P＜0.01),即成功建立了脂肪肝细胞模型.EGCG干预脂肪肝细胞后,细胞的脂质含量明显减少,A值下降到(0.24±0.07) mM(P＜0.05),葡萄糖消耗量增加到(1.67 ±0.07)mM(P＜0.05),与DNA甲基化转移酶抑制剂5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)具有相同的效应.DNA甲基化转移酶DNMT1和DNMT3a基因在大鼠脂肪肝细胞中的mRNA表达水平分别增加了1.5和6倍(P＜0.05),EGCG和5-Aza-CdR均能够明显降低这两个基因的表达.DNMT3b在各处理组中没有明显差异.结论 EGCG可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3a的表达,对脂肪和葡萄糖代谢中的关键基因去甲基化并使这些基因的表达上调,从而改善细胞内脂质沉积和胰岛素抵抗的状态.
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