重组人血管内皮细胞生长因子121cDNA的基因克隆、表达和鉴定

来源 :生物化学与生物物理进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sz10088

【摘要】

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应用RT-PCR方法,扩增人VEGF121 cDNA基因片段,与酵母表达载体pPIC9K重组,获得表达质粒p9KVEGF121.该质粒转化毕赤酵母菌GS115,用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,PCR鉴定VEGF12

【作者】

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王跃祥官孝群杨健莫炜宋后燕

【机构】

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复旦大学医学院分子遗传教研室

【出处】

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生物化学与生物物理进展

【发表日期】

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2002年3期

【关键词】

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重组人血管内皮细胞生长因子121 CDNA 基因克隆表达鉴定血管生成血管通透毕赤酵母 VF-GF(121) cDNA clone Pichia Pas

【基金项目】

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复旦大学校科研和教改项目

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应用RT-PCR方法,扩增人VEGF121 cDNA基因片段,与酵母表达载体pPIC9K重组,获得表达质粒p9KVEGF121.该质粒转化毕赤酵母菌GS115,用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,PCR鉴定VEGF121 cDNA与酵母染色体整合状态,高拷贝转化子用甲醇诱导表达.工程菌用5 L发酵罐发酵,表达产物r-hVEGF121占培养液中总蛋白量70%以上.纯化产物促进牛毛细血管内皮(BCE)细胞增殖,并强烈促进血管通透.

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