【摘 要】
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观察淫羊藿苷(icariin)对氧化应激诱导主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用,并从内质网应激对血管钙化促进作用探讨淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化钙化病变的分子机制,为淫羊藿抗动脉粥样硬化机制的研究提供新的思路.实验采用组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,通过含过氧化氢(H2O2)的高糖DMEM完全钙化培养基诱导3周建立VSMCs钙化模型,并分成不同的处理组.淫羊藿苷在刺激1周后给予细胞起到预保护作用.利用CCK-8(cell count
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院心脏内科,陕西西安710061
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观察淫羊藿苷(icariin)对氧化应激诱导主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用,并从内质网应激对血管钙化促进作用探讨淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化钙化病变的分子机制,为淫羊藿抗动脉粥样硬化机制的研究提供新的思路.实验采用组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,通过含过氧化氢(H2O2)的高糖DMEM完全钙化培养基诱导3周建立VSMCs钙化模型,并分成不同的处理组.淫羊藿苷在刺激1周后给予细胞起到预保护作用.利用CCK-8(cell counting kit-8)法检测VSMCs活性;同时采用茜素红-S染色对细胞钙化程度进行观察,并采用磷酸苯二钠微板法检测VSMCs中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性,采用偶氮胂Ⅲ法测定VSMCs中钙含量;real-time PCR法检测VSMCs骨化相关基因骨钙素(osteocalcin,OC)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ a)mR-NA的表达;Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Runx2、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)和真核细胞翻译起始因子(eIF)-2α蛋白的表达.结果 显示,H2O2可以明显诱导VSMCs钙化,增加VSMCs中ALP活性和钙含量,促进OC、OPN、Runx2和Col Ⅰ a mRNA及Runx2蛋白的表达,减少α-SMA表达,同时ATF4表达和eTF2α蛋白磷酸化也明显升高.淫羊藿苷可以显著降低H2O2诱导的VSMCs钙化,抑制VSMCs中ALP活性和钙含量,下调OC、OPN、Runx2和Col Ⅰa mRNA及Runx2蛋白的表达水平,相对增加α-SMA表达,同时ATF4表达和eTF2α蛋白磷酸化也明显降低.结果 表明,淫羊藿苷可以通过下调VSMCs骨化标志因子及ALP活性和钙含量,达到抑制VSMCs钙化的作用,这种作用可能与淫羊藿苷下调Runx2表达,抑制内质网应激ATF4和eTF2α介导的细胞钙化途径相关.
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