论文部分内容阅读
摘 要：本文采用高校液相测定了白芷药材中欧前胡素和异欧前胡素的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）为流动相，检测波长为304nm；异欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。异欧前胡素和欧前胡素的平均回收率分别为99.5%、99.6%，RSD为0.87%（n=6）、0.89%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于白芷药材中异欧前胡素和欧前胡素的含量测定。
关键词：白芷药材；异欧前胡素；欧前胡素
白芷具有祛风湿，活血排脓，生肌止痛的功效。《日华子本草》记载："治目赤胬肉，及补胎漏滑落，破宿血，补新血，乳痈、发背、瘰疬、肠风、痔瘘，排脓，疮痍、疥癣，止痛生肌，去面皯疵瘢。白芷常用于头痛、牙痛、鼻渊、痈疽疮疡、皮肤瘙痒等。白芷具有镇痛、抗菌、平喘、抗肿瘤、保肝、兴奋运动和呼吸中枢、光毒性等方面的药理作用[1-4]。本文采用高校液相测定了白芷药材中欧前胡素和异欧前胡素的含量。
1 仪器与试药
LC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；U-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。异欧前胡素和欧前胡素对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、醋酸钠（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、三乙胺（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、磷酸（济南圣和化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5-6]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）；检测波长为304nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按欧前胡素峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取白芷药材适量，粉碎成细粉，精密称取，置锥形瓶中，加甲醇适量，超声处理三十分钟，放置至室温，过滤，将滤液转移至50毫升容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.3 对照品溶液的制备
分别精密称取欧前胡素和异欧前胡素对照品2mg、2mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 标准曲线的制备
制备浓度为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的异欧前胡素对照品溶液，制备浓度为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的欧前胡素对照品溶液。分别按异欧前胡素、欧前胡素的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，异欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取异欧前胡素和欧前胡素对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.66%和0.71%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别称取同批白芷药材样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.77%，0.78%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3項下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时进样测定，供试品异欧前胡素和欧前胡素峰面积的RSD分别为0.77%和0.79%。结果表明异欧前胡素和欧前胡素至少在4h内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的异欧前胡素和欧前胡素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.87%和0.89%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定五批白芷药材样品中异欧前胡素和欧前胡素的含量。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-水（30∶35∶35），乙腈-0.05%磷酸（14：86），甲醇-乙腈-水（40：40：20），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）为流动相。白芷药材中异欧前胡素和欧前胡素的含量为不少于0.7mg/g和1.1mg/g。
参考文献
[1]张宇，李婷，杨建，赵洁，贺建宇，陈琦.白芷中有效成分的筛选、分析及对大鼠血管活性的影响[J].西北药学杂志，2015（01）.
[2]谢谦，李顺祥，江星明，廖端芳，王炜，Abass Ali，Kevin K.Schrader，Stephen O.Duke，Charles L.Cantrell，David E.Wedge.生物活性指导下的白芷中抗真菌香豆素的分离[A].2013全国中药与天然药物高峰论坛暨第十三届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].2013.
[3]聂红，沈映君.白芷总挥发油对疼痛模型大鼠的β-内啡肽、促肾上腺皮质激素、一氧化氮及前阿黑皮素的影响[J].中国中药杂志，2002（09）.
[4]赵兴增，冯煦，董云发.白芷的化学成分和药理作用研究进展[A].药用植物研究与中药现代化——第四届全国药用植物学与植物药学术研讨会论文集[C].2004.
[5]王鸣，孙浩，冯煦，顾红梅，张建华.RP-HPLC测定杭白芷不同部位5种香豆素的含量[J].中国野生植物资源，2013（04）.
[6]贾敏如，王梦月，金曲嫫，马逾英，唐声武，熊英，蒋桂华.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志，2003（05）.
关键词：白芷药材；异欧前胡素；欧前胡素
白芷具有祛风湿，活血排脓，生肌止痛的功效。《日华子本草》记载："治目赤胬肉，及补胎漏滑落，破宿血，补新血，乳痈、发背、瘰疬、肠风、痔瘘，排脓，疮痍、疥癣，止痛生肌，去面皯疵瘢。白芷常用于头痛、牙痛、鼻渊、痈疽疮疡、皮肤瘙痒等。白芷具有镇痛、抗菌、平喘、抗肿瘤、保肝、兴奋运动和呼吸中枢、光毒性等方面的药理作用[1-4]。本文采用高校液相测定了白芷药材中欧前胡素和异欧前胡素的含量。
1 仪器与试药
LC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；U-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。异欧前胡素和欧前胡素对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、醋酸钠（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、三乙胺（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、磷酸（济南圣和化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5-6]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）；检测波长为304nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按欧前胡素峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取白芷药材适量，粉碎成细粉，精密称取，置锥形瓶中，加甲醇适量，超声处理三十分钟，放置至室温，过滤，将滤液转移至50毫升容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.3 对照品溶液的制备
分别精密称取欧前胡素和异欧前胡素对照品2mg、2mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 标准曲线的制备
制备浓度为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的异欧前胡素对照品溶液，制备浓度为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的欧前胡素对照品溶液。分别按异欧前胡素、欧前胡素的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，异欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；欧前胡素在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取异欧前胡素和欧前胡素对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.66%和0.71%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别称取同批白芷药材样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.77%，0.78%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3項下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时进样测定，供试品异欧前胡素和欧前胡素峰面积的RSD分别为0.77%和0.79%。结果表明异欧前胡素和欧前胡素至少在4h内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的异欧前胡素和欧前胡素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.87%和0.89%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定五批白芷药材样品中异欧前胡素和欧前胡素的含量。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-水（30∶35∶35），乙腈-0.05%磷酸（14：86），甲醇-乙腈-水（40：40：20），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）为流动相。白芷药材中异欧前胡素和欧前胡素的含量为不少于0.7mg/g和1.1mg/g。
参考文献
[1]张宇，李婷，杨建，赵洁，贺建宇，陈琦.白芷中有效成分的筛选、分析及对大鼠血管活性的影响[J].西北药学杂志，2015（01）.
[2]谢谦，李顺祥，江星明，廖端芳，王炜，Abass Ali，Kevin K.Schrader，Stephen O.Duke，Charles L.Cantrell，David E.Wedge.生物活性指导下的白芷中抗真菌香豆素的分离[A].2013全国中药与天然药物高峰论坛暨第十三届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].2013.
[3]聂红，沈映君.白芷总挥发油对疼痛模型大鼠的β-内啡肽、促肾上腺皮质激素、一氧化氮及前阿黑皮素的影响[J].中国中药杂志，2002（09）.
[4]赵兴增，冯煦，董云发.白芷的化学成分和药理作用研究进展[A].药用植物研究与中药现代化——第四届全国药用植物学与植物药学术研讨会论文集[C].2004.
[5]王鸣，孙浩，冯煦，顾红梅，张建华.RP-HPLC测定杭白芷不同部位5种香豆素的含量[J].中国野生植物资源，2013（04）.
[6]贾敏如，王梦月，金曲嫫，马逾英，唐声武，熊英，蒋桂华.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志，2003（05）.