应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

来源 :中国生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangjian_heu
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目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬(GPX)活性的含硒单链抗体酶。方法 利用RT-PCR方 法从杂交瘤细胞株2F3中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经DNA序列测定后,构建成表达载体 pTMF-scFv,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒pTMF-scFv分别转 化入大肠杆菌JM109(DE3)、BL21(DE3)和 BL21(coden plus),表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的5%-10%、15%- 20%和 25%-30%。该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为30000。其 GPX活性为3400U/μmol,接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。
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