【摘 要】
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本研究以贵州羊传染性胸膜肺炎支原体分离株(GM01株)基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增目的基因RPS11,并克隆到pET28a(+)载体,成功构建了重组质粒pET28a-RPS11,将其转化至大肠
【基金项目】
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贵州省科技计划项目(黔科合NZ[2013]3025)
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本研究以贵州羊传染性胸膜肺炎支原体分离株(GM01株)基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增目的基因RPS11,并克隆到pET28a(+)载体,成功构建了重组质粒pET28a-RPS11,将其转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中诱导表达重组RPS11蛋白并建立了羊传染性胸膜肺炎间接ELISA检测方法。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量为19 kDa,纯度为85%,具有良好的抗原性及特异性;检测方法经条件优化,确定了抗原包被浓度为1μg/mL,血清稀释度为1∶400,酶标二抗工作浓度为1∶4000
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