论文部分内容阅读
摘要探讨基层血清学实验室的管理与质量控制，为临床科室提供正确、可靠的检测结果。对实验人员，血清标本，仪器，质量控制等要素进行分析，从而规范血清学实验室，减少偏差提高检测水平，为疾病的辅助诊断提供技术保障。
关键词：血清实验室管理质量控制
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.640
【中图分类号】R-1【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）09-0382-01
在临床免疫学检验中，血清学检验一般应用较为广泛，在临床检验工作中起着非常重要的意义[1，2]。由于现代医药卫生的发展，酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）技术已趋成熟[3，4]，以及酶标分析仪的广泛使用，基层医疗单位已大量的开展了相关的血清学检测工作，但血清学实验室的好坏直接影响着临床诊断与治疗。因此，对实验人员，血清标本，仪器，质量控制等相关要素的分析，从而对我单位血清学实验室的规范化管理与质量控制有着一定的启迪作用。
1实验室人员
由于基层单位条件、经费有限，专业技术人员接确新技术、新知识的机会少，且人员少，任务重，外出培训的时间有限，以及有部份工作人员责任心不强[5]。因而，对实验室人员的规范化管理应满足以下方面：①具备与工作相适应的专业理论知识，能够准确运用和掌握临床检验知识尤其是临床免疫学相关知识与技能，了解现代医学检验的发展；②具备一定实验技能和操作水平，注重處理问题和解决问题的培养，熟练操作相关设备，能够熟练运用现代多媒体技术；③加强人员培训，尽可能提供条件让其进修学习，积极参加短期研讨培训会，要求技术人员定期进行继续学分教育，总结工作经验，开展岗位练兵，所有检测人员应通过培训、考核合格后，方能上岗；④查阅文献，适时提高科研能力培养，撰写论文；⑤提高人员待遇，出台引进相关人材政策，制定检验工作中有毒有害岗位津贴，稳定当前技术人员；⑥积极树立爱岗敬业精神，兢兢业业，发扬不怕苦，不怕累的工作态度和作风。
2血清标本
血清标本的好坏，绝对影响着检验中期和检验后期工作；通常检验工作中，为不影响检测结果，血清标本的采集、处理、保存有着严格的要求。
2.1标本的采集时机与部位。应正确选择采集的时间与部位，收到的标本尽快分离血清或血浆并暂时存放在4℃环境中，长期保存应保存在-20℃。防止脂浊、黄疸、溶血及药物对检验结果的干扰，
2.2标本的质与量。采集疑似病例静脉血，量可根据检验要求，采集足够的量，可用离心机分离血清或在室温下凝固分离血清，或冷藏条件下放置，直到血清完全析出；在无菌条件下，将血清移至外螺旋盖带垫圈的无菌管中，避免吸到红血球。
2.3标本保存。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-20℃以下。冻存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。
2.4标本处理。在ELISA检验中，要注意避免出现严重溶血，因血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测[6]。
3设备
随着现代医学技术的发展，在基层检验工作中引入了很多仪器设备，为保证所有在用仪器设备技术性能处于合格及良好的受控状态，确保实验顺利进行。实验室应建立仪器设备档案资料，加强日常维护和保养，对于结果有影响的计量设备（酶标分析仪），必须定期进行校准，合格后方可使用；并由专人负责，摆放在干燥、清结专用房间，出入和使用应建立登记制度。同时要注意防霉、防潮、防蛀及防火安全，加强室内通风，远离火源，配备良好的消防设施。
同时还要对血清学检验中的常用的几种设备进行管理：①移液器定期进行校准，因ELISA的加样量小，其准确性直接影响试验结果。检验工作应选择量程合适的移液器；②保证水浴锅或温箱的温度正确，并用外部温度计对仪器温度进行校准；③定期检查洗板机，并清洗液体通道，检查液孔有无堵塞。
4血清学实验室质量控制
4.1室内质量控制。
4.1.1室内质控品的制备与保存[7]。①收集新鲜无溶血、无黄疸、无细菌污染的需要相关检验项目的阳性血清，56℃加热30min灭活；②离心或过滤除去沉淀物，将抗体阳性血清进行倍比稀释并测定相应稀释度光密度（Optical Density，OD）；③取OD值是本次实验临界值1.0～2.0倍的稀释度作为最终稀释倍数，用健康人的血清及无菌生理盐水对原阳性血标本进行稀释；④用0.45μm滤器将已稀释的血清过滤除菌，分装成小管，注明日期及名称，置于-20℃保存。
4.1.2质控统计方法。首先可采用“即刻法”室内质控[8]，在获取足够数据后，即质控血清进行20次检测后转入常规质控图法（Levey-Jennings）[9]。即刻法”质控只要连续3次质控血清测定值，就可得一组S/CO比值（S为质控血清，CO为Cut off值）即可对第3次测定结果进行质控。计算SI上限值和SI下限值，将SI上限值、SI下限值与“即刻法”质控SI值表中的数值比较。Levey-Jennings质控将前20次质控血清的OD值计算出均值和标准差（s）。以S/CO值作纵坐标（Y轴），实验次数作为横坐标（X轴），绘制质控图。 4.2室间质量控制。接受上级单位的年度盲样考核、随机抽样及现场检查指导；以及同一地区不同实验室的交叉检测[10]。
5试剂
检测试剂应统一采购使用，如更换试剂，需要进行严格比对实验，建立试剂存货管理系统。选择试剂应注意生产厂家的批号文号，试剂的特异性、灵敏度、重复性、符合率，以及基层使用的合理性与操作简便性[11]。
6生物安全管理与实验室环境
加强岗前生物安全培训与管理，有利于检验工作的顺利开展，有利于避免环境污染和危害检验人员、医生及患者的身体健康。来自所有病例的血清标本都被认为是具有传染性。标本采集、检验过程中，应保持容器完好，无泄漏。处理标本的工作人员都应戴上手套，穿防护服，戴帽子、口罩。在标本处理过程中，手或其它部位的皮肤在接触其血清后必须立即彻底清洗。所有检验过后的污染物及血清标本都应经过消毒和高压处理[12]。
实验工作环境应建立良好通风设施，降低有害物质的浓度，保护自身安全。建立岗前健康体检及本底血清资料的管理。同时，考滤实验室双相配备，防止突然断电对检验过程的影响。设备未用时及时关闭设备和电源，做好防盗、防尘、防潮工作，保障设备有效可靠。
7其他
在实验室建设和管理中，还应加强化学试剂的管理，了解其化学特性，分类保存，对于剧毒试剂应专人管理，出入库应相关负责人签字同意，方可使用。加强通风，远离火源，避免发生爆炸和火灾。同时，患者资料、标本资料、检测结果录入相关检验登记册中，同时保存好记录。
总之，血清学检验工作在基层医疗卫生工作中有不可分割的重要部分，加强其规范化管理与质量控制，促进其检验水平的提高，进一步开创我基层单位检验工作新局面。
参考文献
[1]陆永绥，张伟民.临床检验管理与技术规程[M].浙江：浙江大学出版社，2004，651-656
[2]王兰兰，许化溪.临床免疫学检验[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2012
[3]李会英.酶联免疫吸附试验影响因素的分析[J].检验医学与临床，2007，4（10）：985-986
[4]董文婷.酶联免疫吸附试验的常見影响因素及处理方法[J].基层医学论坛，2013，17（23）：3072-3073
[5]董爱萍，姚锐.对临床检验医师职业的探讨[J].国际检验医学杂志，2013，34（6）：763-764
[6]姜玉祥，王丽，李晓娟.影响ELISA试验效果常见原因分析[J].牡丹江医学院学报，2003，24（3）：49-50
[7]张淑琼.基层医院室内质控品的自制及应用[J].检验医学与临床，2008，5（5）：288-289
[8]张玲.即刻法室内质控在ELISA实验中的应用[J].临床输血与检验，2002，4（1）：62-63
[9]丁顺娥，施炜.基层医院HIV抗体测定室内质控初探[J].中国医药指导，2010，8（25）：57-58〖ZK）〗
[10]杨利黎，李炳芝，郭伟，等.临床实验室质量控制和质量保证要素分析[J].检验医学与临床，2008，5（8）：479-480
[11]颜秀娟，邱昌文，袁婷，等.浅谈ELISA 试剂使用前的确认[J].中国医药指导，2012，10（2）：283-285
[12]刘书蓉，曾琳，周琳瑶，等.检验科实验室生物安全管理探讨[J].国际检验医学杂志，2014，35（2）：252-254
关键词：血清实验室管理质量控制
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.09.640
【中图分类号】R-1【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）09-0382-01
在临床免疫学检验中，血清学检验一般应用较为广泛，在临床检验工作中起着非常重要的意义[1，2]。由于现代医药卫生的发展，酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）技术已趋成熟[3，4]，以及酶标分析仪的广泛使用，基层医疗单位已大量的开展了相关的血清学检测工作，但血清学实验室的好坏直接影响着临床诊断与治疗。因此，对实验人员，血清标本，仪器，质量控制等相关要素的分析，从而对我单位血清学实验室的规范化管理与质量控制有着一定的启迪作用。
1实验室人员
由于基层单位条件、经费有限，专业技术人员接确新技术、新知识的机会少，且人员少，任务重，外出培训的时间有限，以及有部份工作人员责任心不强[5]。因而，对实验室人员的规范化管理应满足以下方面：①具备与工作相适应的专业理论知识，能够准确运用和掌握临床检验知识尤其是临床免疫学相关知识与技能，了解现代医学检验的发展；②具备一定实验技能和操作水平，注重處理问题和解决问题的培养，熟练操作相关设备，能够熟练运用现代多媒体技术；③加强人员培训，尽可能提供条件让其进修学习，积极参加短期研讨培训会，要求技术人员定期进行继续学分教育，总结工作经验，开展岗位练兵，所有检测人员应通过培训、考核合格后，方能上岗；④查阅文献，适时提高科研能力培养，撰写论文；⑤提高人员待遇，出台引进相关人材政策，制定检验工作中有毒有害岗位津贴，稳定当前技术人员；⑥积极树立爱岗敬业精神，兢兢业业，发扬不怕苦，不怕累的工作态度和作风。
2血清标本
血清标本的好坏，绝对影响着检验中期和检验后期工作；通常检验工作中，为不影响检测结果，血清标本的采集、处理、保存有着严格的要求。
2.1标本的采集时机与部位。应正确选择采集的时间与部位，收到的标本尽快分离血清或血浆并暂时存放在4℃环境中，长期保存应保存在-20℃。防止脂浊、黄疸、溶血及药物对检验结果的干扰，
2.2标本的质与量。采集疑似病例静脉血，量可根据检验要求，采集足够的量，可用离心机分离血清或在室温下凝固分离血清，或冷藏条件下放置，直到血清完全析出；在无菌条件下，将血清移至外螺旋盖带垫圈的无菌管中，避免吸到红血球。
2.3标本保存。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-20℃以下。冻存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。
2.4标本处理。在ELISA检验中，要注意避免出现严重溶血，因血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测[6]。
3设备
随着现代医学技术的发展，在基层检验工作中引入了很多仪器设备，为保证所有在用仪器设备技术性能处于合格及良好的受控状态，确保实验顺利进行。实验室应建立仪器设备档案资料，加强日常维护和保养，对于结果有影响的计量设备（酶标分析仪），必须定期进行校准，合格后方可使用；并由专人负责，摆放在干燥、清结专用房间，出入和使用应建立登记制度。同时要注意防霉、防潮、防蛀及防火安全，加强室内通风，远离火源，配备良好的消防设施。
同时还要对血清学检验中的常用的几种设备进行管理：①移液器定期进行校准，因ELISA的加样量小，其准确性直接影响试验结果。检验工作应选择量程合适的移液器；②保证水浴锅或温箱的温度正确，并用外部温度计对仪器温度进行校准；③定期检查洗板机，并清洗液体通道，检查液孔有无堵塞。
4血清学实验室质量控制
4.1室内质量控制。
4.1.1室内质控品的制备与保存[7]。①收集新鲜无溶血、无黄疸、无细菌污染的需要相关检验项目的阳性血清，56℃加热30min灭活；②离心或过滤除去沉淀物，将抗体阳性血清进行倍比稀释并测定相应稀释度光密度（Optical Density，OD）；③取OD值是本次实验临界值1.0～2.0倍的稀释度作为最终稀释倍数，用健康人的血清及无菌生理盐水对原阳性血标本进行稀释；④用0.45μm滤器将已稀释的血清过滤除菌，分装成小管，注明日期及名称，置于-20℃保存。
4.1.2质控统计方法。首先可采用“即刻法”室内质控[8]，在获取足够数据后，即质控血清进行20次检测后转入常规质控图法（Levey-Jennings）[9]。即刻法”质控只要连续3次质控血清测定值，就可得一组S/CO比值（S为质控血清，CO为Cut off值）即可对第3次测定结果进行质控。计算SI上限值和SI下限值，将SI上限值、SI下限值与“即刻法”质控SI值表中的数值比较。Levey-Jennings质控将前20次质控血清的OD值计算出均值和标准差（s）。以S/CO值作纵坐标（Y轴），实验次数作为横坐标（X轴），绘制质控图。 4.2室间质量控制。接受上级单位的年度盲样考核、随机抽样及现场检查指导；以及同一地区不同实验室的交叉检测[10]。
5试剂
检测试剂应统一采购使用，如更换试剂，需要进行严格比对实验，建立试剂存货管理系统。选择试剂应注意生产厂家的批号文号，试剂的特异性、灵敏度、重复性、符合率，以及基层使用的合理性与操作简便性[11]。
6生物安全管理与实验室环境
加强岗前生物安全培训与管理，有利于检验工作的顺利开展，有利于避免环境污染和危害检验人员、医生及患者的身体健康。来自所有病例的血清标本都被认为是具有传染性。标本采集、检验过程中，应保持容器完好，无泄漏。处理标本的工作人员都应戴上手套，穿防护服，戴帽子、口罩。在标本处理过程中，手或其它部位的皮肤在接触其血清后必须立即彻底清洗。所有检验过后的污染物及血清标本都应经过消毒和高压处理[12]。
实验工作环境应建立良好通风设施，降低有害物质的浓度，保护自身安全。建立岗前健康体检及本底血清资料的管理。同时，考滤实验室双相配备，防止突然断电对检验过程的影响。设备未用时及时关闭设备和电源，做好防盗、防尘、防潮工作，保障设备有效可靠。
7其他
在实验室建设和管理中，还应加强化学试剂的管理，了解其化学特性，分类保存，对于剧毒试剂应专人管理，出入库应相关负责人签字同意，方可使用。加强通风，远离火源，避免发生爆炸和火灾。同时，患者资料、标本资料、检测结果录入相关检验登记册中，同时保存好记录。
总之，血清学检验工作在基层医疗卫生工作中有不可分割的重要部分，加强其规范化管理与质量控制，促进其检验水平的提高，进一步开创我基层单位检验工作新局面。
参考文献
[1]陆永绥，张伟民.临床检验管理与技术规程[M].浙江：浙江大学出版社，2004，651-656
[2]王兰兰，许化溪.临床免疫学检验[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2012
[3]李会英.酶联免疫吸附试验影响因素的分析[J].检验医学与临床，2007，4（10）：985-986
[4]董文婷.酶联免疫吸附试验的常見影响因素及处理方法[J].基层医学论坛，2013，17（23）：3072-3073
[5]董爱萍，姚锐.对临床检验医师职业的探讨[J].国际检验医学杂志，2013，34（6）：763-764
[6]姜玉祥，王丽，李晓娟.影响ELISA试验效果常见原因分析[J].牡丹江医学院学报，2003，24（3）：49-50
[7]张淑琼.基层医院室内质控品的自制及应用[J].检验医学与临床，2008，5（5）：288-289
[8]张玲.即刻法室内质控在ELISA实验中的应用[J].临床输血与检验，2002，4（1）：62-63
[9]丁顺娥，施炜.基层医院HIV抗体测定室内质控初探[J].中国医药指导，2010，8（25）：57-58〖ZK）〗
[10]杨利黎，李炳芝，郭伟，等.临床实验室质量控制和质量保证要素分析[J].检验医学与临床，2008，5（8）：479-480
[11]颜秀娟，邱昌文，袁婷，等.浅谈ELISA 试剂使用前的确认[J].中国医药指导，2012，10（2）：283-285
[12]刘书蓉，曾琳，周琳瑶，等.检验科实验室生物安全管理探讨[J].国际检验医学杂志，2014，35（2）：252-254