目的探讨颗粒型环瓜氨酸肽抗原的制备方法,并对实验条件进行优化。方法通过碳二亚胺交联法将人工合成的CCP与BSA共价偶联,使偶联产物蛋白大小在70-170KD之间,经紫外吸收光谱鉴定偶联成功。采用碳二亚胺两步法将偶联成功的CCP与BSA复合物又与聚苯乙烯微球偶联,优化偶联条件,根据蛋白偶联量和偶联效率判断偶联效果。结果 (1)BSA与CCP偶联质量比为1∶1,EDC与NHS用量比为2∶3,偶联pH为6.0,BSA与CCP偶联可以达到较好的效果。BSA与CCP偶联产物在70KD-170KD之间,紫外吸收峰有明显左移。(2)微球与偶联蛋白的吸附效率随着EDC用量的增大而增大,当EDC用量达到7.5 mg/ml时,偶联蛋白最大效率达到63.66%。(3)随着偶联时间的延长,蛋白偶联微球的效率不断增加,在偶联时间为0.5-2h内,偶联效率增加最快,当反应时间2h后,反应趋于平衡。(4)对不同偶联反应pH值条件进行筛选,pH为7.5时偶联效果最好,pH7.0-8.0为适宜偶联的pH范围。结论 CCP-BSA偶联产物蛋白与胶乳颗粒偶联,当EDC浓度为7.5mg/ml,偶联时间为2h,反应PH值为7.5,蛋白偶联效率可达到63.66%。