【摘 要】
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目的建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法，将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。方法PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段，使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。瞬时转染293T细胞，并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme－linked immunosorbent ass
【机 构】
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东南大学公共卫生学院，南京 210009,东南大学公共卫生学院，南京 210009,江苏省疾病预防控制中心疫苗临床评价所，南京 210009,江苏省疾病预防控制中心疫苗临床评价所，南京 210009,
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目的建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法，将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。
方法PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段，使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。瞬时转染293T细胞，并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme－linked immunosorbent assay，ELISA)和间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody，IFA)检测抗体表达盒中ScFv的表达和抗体的活性。从噬菌体库淘选出的阳性克隆中挑取96个抗体，用该表达盒进行高通量表达，并对表达效果进行评价。
结果成功扩增出3个基因片段，并将3个片段连接成1个线性的表达盒。线性表达盒可直接在293T细胞中瞬时表达，表达上清经Western blot检测可见约相对分子质量为38×103的条带；ELISA和IFA结果均显示表达出来的ScFv抗体能与其对应的抗原特异性结合。同时该系统可以用于噬菌体抗体库中抗体基因的高通量表达。
结论成功构建了ScFv的线型表达盒，并实现了抗体的快速高通量表达。
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