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目的
建立并验证测定14型肺炎球菌多糖(pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14，PS14)浓度的双抗体夹心ELISA。
方法采用Protein G亲和层析纯化兔血清，得到兔抗PS14多克隆抗体(多抗)。以鼠抗PS14单克隆抗体(单抗)为捕获抗体，兔抗PS14多抗为检测抗体，碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗，PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度，建立标准曲线，并验证该方法的准确性、精密度和特异性，考察佐剂对该方法的影响。
结果鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml，兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml，标准曲线的范围为9.375 ～ 600.000 ng/ml，线性良好，相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ～ 140%，多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ～110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85%～100%；含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ～110%。
结论成功建立了双抗体夹心ELISA，该方法准确性、精密度、特异性良好，且检测结果不受佐剂的影响，具有一定耐用性。