【摘 要】
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目的探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞,再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸(E
【机 构】
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第四军医大学西京阪院烧伤科,解放军总医院第一附属医院（原解放军第三0四医院）全军创伤修复重点实验室京
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划项目(G1999054204);国家自然科学基金重点项目(30230370,30400172);国家自然科学基金面上项目(30170966)
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目的探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞,再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸(EDTA)消化并制成单个表皮细胞悬液,接种至人胎盘型胶原包被的培养瓶内,以Dulbecco改良Eagle培养基/F12(DMEM/F12,1∶1)作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养,37℃静置10~15min,留用快速贴壁细胞继续培养,所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1整合素、角蛋白19(K19)免疫细胞化学染色进行鉴定。结果人胎盘型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长;电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征;细胞周期分析示,第2代中静息期/DNA合成前期(G0/G1期)细胞占86.83%。β1整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。
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