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摘要：目的：探究与建立熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量的测定方法。
方法：使用高效液相色谱法（HPLC）对熟地黄药材中的5-羟甲基糠醛含量进行测定，流动相为乙腈-水，比例为5∶95，在280nm进行检测。
结果：本次研究中的5-羟甲基糠醛线性范围为0.021至0.105μg，线性尚可；平均回收率为99.73%，RSD为1.2%（n=5）。
结论：采用高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定是一种值得推广应用的方法，该法具有操作简便，检测快捷，可靠性高，准确性好，重复性佳等特点。
关键词：高效液相色谱 5-羟甲基糠醛 应用分析
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）06-0036-02
熟地黄是一种重要的临床中药药材，具有滋阴补血，并可补精益髓的功效。最早可以在《本草图经》中找到有关熟地黄的记载，它是玄参科多年生草本植物地黄的根[1]。经过一系列的加工程序，就成了熟地黄，广泛地被应用于临床。熟地黄中具有多种化学成分，主要包括糖类、甙类、氨基酸等。其中糖类在加工炮制过程中降解出5-羟甲基糠醛，该降解产物对人体的内脏与横纹肌具有一定的毒性，还具有神经毒性，当其含量在熟地黄中如果增加了20倍，会在人体中与蛋白质结合，并积蓄中毒。因此我们对熟地黄中的5-羟甲基糠醛需要进行质量控制，以保证药材的质量[2]。以往采用紫外分光光度法进行检测，但该方法易受其他成分的干扰，导致测量结果差异很大。而近年来广泛应用高效液相色谱法对各种化学物质进行分离与检测，具有诸多优点。本文旨在探究与建立通过高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定，现汇报如下。
1 试验仪器与材料
1.1 试验仪器。美国sp-2000高效液相色谱仪、紫外检测器UV-2000。
1.2 试验材料。对照品：5-羟甲基糠醛（美国ACROS Organics）。
样品：熟地黄（哈尔滨药材公司，经相关鉴定为药典品）。
2 试验的方法与结果
采用YWG-ODSC18色谱柱，规格为4.6mm×150mm，5μm。流动相为乙腈-水，比例为5∶95，于280nm的波长下进行测定。柱温为室温，流速控制在1ml/min。
2.1 专属性。在上述的试验条件下，分别进样5-羟甲基糠醛及熟地黄样品，由图谱可知，5-羟甲基糠醛的特征峰保留时间为15min左右，且与其他色谱峰的分离度良好。色谱图如图1、图2所示。
2.2 线性。精密称取5-羟甲基糠醛对照品，加无水甲醇，配成13μg/ml，再分别精密地吸取2、4、6、8、10ml，置于25ml的容量瓶中，继续加无水甲醇到刻度线。分别吸取不同浓度的溶液各20μl，并将其注入液相色谱仪中，测定峰面积。以对照品的进样量为横坐标，峰面积则为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：Y=14616215.8X-44131.1，r=0.9990。线性范围为0.021至0.105μg，对照品的浓度和峰面积值呈线性的关系。
2.3 精密度。在上述的色谱条件下对同一种浓度的对照品连续6次进样，记录色谱图。由结果可知，平均峰面积值为853041.RSD为1.3%。
2.4 加样回收率。精密称已知5-羟甲基糠醛含量的样品5份，分别加入一定量的对照品，按照2.2中操作进行试验，记录色谱图。由结果可
知，平均回收率结果为99.72%，RSD为1.3%（n=5）。
2.5 定量限、检测限。在上述色谱条件下，由基线噪音和对照品溶液的峰现象来确定检测限和定量限，将对照品溶液稀释100倍即为检测限（3倍基线噪音），将对照品溶液稀释30倍即为定量限（10倍基线噪音）。
2.6 样品测定。将熟地黄碾碎，精密地称取0.2g。放置于索氏提取器，并加入适量的氯仿，水浴回流提取一直到氯仿无色。接着回收氯仿直到干燥。在残渣中加入无水甲醇，将其溶解，并定量转移到10ml的容量瓶中，加入无水甲醇到刻度线，混合摇匀。精密吸取20μl后进行测定。结果如表1所示。供试品的色谱图见图2所示。
3 讨论
本次研究中的5-羟甲基糠醛线性范围为0.021至0.105μg，线性尚可；平均回收率为99.72%，RSD为1.3%（n=5），本次研究采用高效液相色谱法的测定结果较为准确，线性范围也尚可，操作也不繁琐，具有一定的可靠性与重复性。综上所述，采用高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定是一种值得推广应用的方法，该法具有操作简便，检测快捷，可靠性高，准确性好，重复性佳等特点。
关于熟地黄的提取实验，推荐使用氯仿作为溶剂。因为甲醇和乙醇会在时间增加的基础上，造成5-羟甲基糠醛的含量也相应增加。有关研究表明[4]，醇溶剂在加热处理熟地黄后，会将部分还原糖转化成5-羟甲基糠醛。
参考文献
[1] 张清波，乔菲，陈晓雪，等.HPLC测定熟地黄中5_羟甲基糠醛的含量[J].中国药品标准，2009，10（5）：33-34
[2] 秦向阳，周军，李晓晔，等.RP-HPLC法测定熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量[M].第四军医大学学报，2009，27（6）：510-512
[3] 李恒，高晔.对市场三产地的熟地黄有效成分比较研究[J]，中国现代医生，2009，47（10）：42-43
[4] 曹建军，梁宗锁，杨东风，等.应用HPLC指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点[J].中国中药杂志，2010，35（19）：2556-2557
方法：使用高效液相色谱法（HPLC）对熟地黄药材中的5-羟甲基糠醛含量进行测定，流动相为乙腈-水，比例为5∶95，在280nm进行检测。
结果：本次研究中的5-羟甲基糠醛线性范围为0.021至0.105μg，线性尚可；平均回收率为99.73%，RSD为1.2%（n=5）。
结论：采用高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定是一种值得推广应用的方法，该法具有操作简便，检测快捷，可靠性高，准确性好，重复性佳等特点。
关键词：高效液相色谱 5-羟甲基糠醛 应用分析
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）06-0036-02
熟地黄是一种重要的临床中药药材，具有滋阴补血，并可补精益髓的功效。最早可以在《本草图经》中找到有关熟地黄的记载，它是玄参科多年生草本植物地黄的根[1]。经过一系列的加工程序，就成了熟地黄，广泛地被应用于临床。熟地黄中具有多种化学成分，主要包括糖类、甙类、氨基酸等。其中糖类在加工炮制过程中降解出5-羟甲基糠醛，该降解产物对人体的内脏与横纹肌具有一定的毒性，还具有神经毒性，当其含量在熟地黄中如果增加了20倍，会在人体中与蛋白质结合，并积蓄中毒。因此我们对熟地黄中的5-羟甲基糠醛需要进行质量控制，以保证药材的质量[2]。以往采用紫外分光光度法进行检测，但该方法易受其他成分的干扰，导致测量结果差异很大。而近年来广泛应用高效液相色谱法对各种化学物质进行分离与检测，具有诸多优点。本文旨在探究与建立通过高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定，现汇报如下。
1 试验仪器与材料
1.1 试验仪器。美国sp-2000高效液相色谱仪、紫外检测器UV-2000。
1.2 试验材料。对照品：5-羟甲基糠醛（美国ACROS Organics）。
样品：熟地黄（哈尔滨药材公司，经相关鉴定为药典品）。
2 试验的方法与结果
采用YWG-ODSC18色谱柱，规格为4.6mm×150mm，5μm。流动相为乙腈-水，比例为5∶95，于280nm的波长下进行测定。柱温为室温，流速控制在1ml/min。
2.1 专属性。在上述的试验条件下，分别进样5-羟甲基糠醛及熟地黄样品，由图谱可知，5-羟甲基糠醛的特征峰保留时间为15min左右，且与其他色谱峰的分离度良好。色谱图如图1、图2所示。
2.2 线性。精密称取5-羟甲基糠醛对照品，加无水甲醇，配成13μg/ml，再分别精密地吸取2、4、6、8、10ml，置于25ml的容量瓶中，继续加无水甲醇到刻度线。分别吸取不同浓度的溶液各20μl，并将其注入液相色谱仪中，测定峰面积。以对照品的进样量为横坐标，峰面积则为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：Y=14616215.8X-44131.1，r=0.9990。线性范围为0.021至0.105μg，对照品的浓度和峰面积值呈线性的关系。
2.3 精密度。在上述的色谱条件下对同一种浓度的对照品连续6次进样，记录色谱图。由结果可知，平均峰面积值为853041.RSD为1.3%。
2.4 加样回收率。精密称已知5-羟甲基糠醛含量的样品5份，分别加入一定量的对照品，按照2.2中操作进行试验，记录色谱图。由结果可
知，平均回收率结果为99.72%，RSD为1.3%（n=5）。
2.5 定量限、检测限。在上述色谱条件下，由基线噪音和对照品溶液的峰现象来确定检测限和定量限，将对照品溶液稀释100倍即为检测限（3倍基线噪音），将对照品溶液稀释30倍即为定量限（10倍基线噪音）。
2.6 样品测定。将熟地黄碾碎，精密地称取0.2g。放置于索氏提取器，并加入适量的氯仿，水浴回流提取一直到氯仿无色。接着回收氯仿直到干燥。在残渣中加入无水甲醇，将其溶解，并定量转移到10ml的容量瓶中，加入无水甲醇到刻度线，混合摇匀。精密吸取20μl后进行测定。结果如表1所示。供试品的色谱图见图2所示。
3 讨论
本次研究中的5-羟甲基糠醛线性范围为0.021至0.105μg，线性尚可；平均回收率为99.72%，RSD为1.3%（n=5），本次研究采用高效液相色谱法的测定结果较为准确，线性范围也尚可，操作也不繁琐，具有一定的可靠性与重复性。综上所述，采用高效液相色谱法对熟地黄中的5-羟甲基糠醛含量进行测定是一种值得推广应用的方法，该法具有操作简便，检测快捷，可靠性高，准确性好，重复性佳等特点。
关于熟地黄的提取实验，推荐使用氯仿作为溶剂。因为甲醇和乙醇会在时间增加的基础上，造成5-羟甲基糠醛的含量也相应增加。有关研究表明[4]，醇溶剂在加热处理熟地黄后，会将部分还原糖转化成5-羟甲基糠醛。
参考文献
[1] 张清波，乔菲，陈晓雪，等.HPLC测定熟地黄中5_羟甲基糠醛的含量[J].中国药品标准，2009，10（5）：33-34
[2] 秦向阳，周军，李晓晔，等.RP-HPLC法测定熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量[M].第四军医大学学报，2009，27（6）：510-512
[3] 李恒，高晔.对市场三产地的熟地黄有效成分比较研究[J]，中国现代医生，2009，47（10）：42-43
[4] 曹建军，梁宗锁，杨东风，等.应用HPLC指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点[J].中国中药杂志，2010，35（19）：2556-2557