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建立了气相色谱-质谱（GC—MS）测定富硒酵母中硒蛋氨酸含量的方法。比较了3种从样品中提取硒蛋氨酸方法的效果。样品在三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液中酶解24h后，以丁醇及三氟乙酸酐为衍生化试剂对硒蛋氨酸进行衍生化，采用选择离子模式对衍生物进行GC—MS测定。硒蛋氨酸的回收率为98．5％～103．7％，相对标准偏差为0．9％～2．4％，检出限为0．5mg／L（S/N=3）。对实际样品进行测定，得到样品中硒蛋氨酸的含量结果。该法简便快速，准确可靠，灵敏度高。