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根据LAP(leech antihemostatic protein)理论,在分析山蛭素和decorsin结构特征的基础上,利用重组PCR方法,删除了山蛭素氨基酸序列的33位至35位,同时分别插入了RGDS和来源于decorsin的一段PRGDADP序列构建成为2种含RGD序列的山蛭素突变体,分别命名为HRGD1和HRGD2.这2种突变体在毕赤酵母菌株GS115中得到成功表达.经过超滤、阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后,得到纯度高于95%的目的蛋白.通过以chromozym TH为底物的凝血酶酰