【摘 要】
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目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达.方法以逆转录PCR方法扩增抗LPS mAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-T easy.经测序分析后,再分别亚克
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目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达.方法以逆转录PCR方法扩增抗LPS mAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-T easy.经测序分析后,再分别亚克隆入载体pcDNA3,构建成重组载体pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC,并以PCR方法扩增pcD-NA3-LC中包括CMV启动子、轻链序列和BGH Poly(A)在内的轻链表达序列.经适当的限制性内切酶酶切后,插入到质粒pcDNA3-Fd中Fd表达序列的前部,构建成表达载体pcD-NA3-Fab,以脂质体包裹转染CHO细胞.经G418筛选,用ELISA、免疫荧光和Western blot鉴定阳性克隆.结果用ELISA和免疫荧光法,筛选出4株高表达Fab的细胞株.Western blot显示,表达产物的Mr为50 000.同时,ELISA结果显示,该Fab具有良好的结合LPS的活性.结论成功地在CHO细胞中表达抗LPS mAb的Fab段,为进一步鉴定其抗LPS的作用,使之成为诊断和治疗革兰氏阴性细菌感染的工具奠定了基础.
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