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摘 要：山楂叶是蔷薇科植物山里红的干燥叶。黄酮和三萜类化合物为其主要化学成分，具有助消化、降血脂、抗心肌缺血、强心、增强免疫功能、抗肿瘤等多种功效，越来越引起人们重视。本实验利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS以及制备高效液相等方法，对山楂叶乙醇提取物进行分离纯化，得到1个化合物，根据理化性质和光谱数据鉴定了他们的结构为：齐墩果酸。
关键词：山楂叶；结构鉴定；核磁共振光谱；三萜
1 概述
山楂是蔷薇科植物山里红的干燥成熟果实。山楂中的黄酮、三萜类等物质具有助消化、降血脂、抗心肌缺血、强心、增强免疫功能、抗肿瘤等多种功效，越来越引起人们对山楂的重视。其化学成分主要有三萜和黄酮两大类。为开发山楂资源，我们对山楂叶乙醇提取物中的化学成分进行了初步研究，从中分离得到得到2个化合物，鉴定了它们的结构，分别为：齐墩果酸。
2 山楂的化学成分
2.1 黄酮类成分
目前，从山楂中分离得到60余种黄酮类化合物。其主要苷元为：芹菜素（Apigenin）、山奈酚类（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）、槲皮素类（Quercetin）及二氢黄酮类（Bi-hydroflavonoids）等。
2.2 黄烷及其聚合物
花青素（Anthocyanin）、无色花青素（Proanthocyanin）及儿茶精（Catechins）类广泛存在于山楂属植物中，它们多以单体或二聚体、多聚体形式存在。目前，分离得到的这类成分有：（1）矢车菊素（Cyanidin）；（2）（-）-表儿茶精[（-）-Epicatechin]；（3）（+）-儿茶精[（+）-Catechin]；（4）无色缔纹天竺；（5）缔纹天竺苷；（6）二聚无色矢车菊素及其他黄烷聚合物。
2.3 三萜类成分
山楂中的萜类成分包括：熊果酸（Ursolic acid）、齐墩果酸（Oleanolic acid）及山楂酸（Crataegolic acid）。
2.4 其它有机酸
草酸（Oxalic acid）、苹果酸（Malic acid）、柠檬酸（Citric acid）及其甲酯、绿原酸（Chlorogenic acid）、酒石酸（Tartaric acid）、棕榈酸（Palmitic acid）、硬脂酸（Stearic acid）、油酸（Oleic acid）、亚油酸（Linoleic acid）、亚麻酸（Linolenic acid）、琥珀酸（Succinic acid）等。
2.5 山楂中的微量元素及氨基酸
研究表明，中药中的微量元素常与有机酸、氨基酸、肽类等成分络合，产生协同作用而增强其疗效。近几年来，黄锁义等人对我国不同地区的山楂进行了微量元素的测定研究，结果表明，各种山楂中Ca、Fe、Mg、Cu、Zn、Mn等元素的含量较丰富，其中Ca的含量最高，Fe和Mg的含量也较高，其次是Cu、Zn、Mn。山楂中有害元素Pd、Cd、As的含量都小于1‰，远远低于国家限定范围。与山楂是无毒是相一致的。山楂中含有人体必需的微量元素Fe、Ca、Cr、Mn、Zn、Ni、Co，不同种的山楂其所含微量元素的含量略有差异。
3 实验部分
3.1 仪器与材料
3.1.1 仪器
北京泰克X-4显微熔点测定仪，Bruker ARX-300型核磁共振光仪，BSZ-2型自动双重纯水蒸馏器，岛津LC-10AT泵，EYELA旋转蒸发仪。
3.1.2 材料
薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂），聚酰胺（80～120目及200～300目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）， 所用试剂为分析纯。
山楂药材购于辽宁省药材公司。
3.2 提取分离
山楂叶（20 kg），用80%（？渍）乙醇水溶液加热回流提取3次，每次2 h。药液回收至无醇味后用大孔树脂处理，乙醇-水梯度洗脱，收集55%（？渍）乙醇水洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥得棕红色粉末。取50g提取物经聚酰胺（80～120目）柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，再经聚酰胺柱（200～300目）再次分离，得到该化合物。
3.3 结构鉴定
白色无定型粉末（甲醇），Liebermann-Burchard反应阳性。1H-NMR（600 MHz， MeOD）高场区可观察到7个甲基质子的信号δ1.14 （3H， s）， 0.99 （3H，s）， 0.93（3H， s）， 0.92（3H， s）， 0.90 （3H， s）， 0.77 （3H， s）， 0.76 （3H， s）提示化合物7为三萜类化合物，七个甲基均为单峰，故推测为齐墩果烷型的母核。另外观察到一个烯氢信号δ5.28（1H， t， J=3.4 Hz）和一个连氧碳上的质子信号δ3.21（1H， m）。 13C-NMR（150 MHz， MeOD）谱低场区可以观察到羧基碳信号δ182.6， 特征烯键碳信号δ143.6，122.7，连氧碳信号δ79.0。以上数据与参考文献对照基本一致，故鉴定该化合物为齐墩果酸。
3.4 结论
山楂叶（20 kg），用80%（？渍）乙醇水溶液加热回流提取3次，每次2 h。药液回收至无醇味后用大孔树脂处理，乙醇-水梯度洗脱，收集55%（？渍）乙醇水洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥得棕红色粉末。取50 g提取物经聚酰胺（80～120目）柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，再经聚酰胺柱（200～300目）再次分离，得到该化合物。
3.5 讨论
3.5.1 样品量与拌样硅胶量及柱层析硅胶的比例。通常样品量与拌样硅胶量的比例为1：1～1：2；样品量与柱层析硅胶量的比例为1：10～1：20。一般在进行样品粗分时，样品量与柱层析硅胶量的比例选择1：10即可，而在进行样品细分离时，样品量与柱层析硅胶量的比例可选择1：15～1：20。
3.5.2 在进行样品分离时，应先进行薄层预示，根据薄层板的结果来选择合适的洗脱剂，同时，柱层析的洗脱剂比例可以參考薄层预示结果。但通常柱层析的洗脱剂比例比薄层预示中的洗脱剂比例小。
参考文献
[1]Anon. Perf.： Monographs on floral odors V. Ⅱ. Heliotrope， Wallflower， Hawthorn， and the scent of the hayfields. Essent. Oil Record 1921，12，-389～91.
[2]张培成，等.山楂果化学成分的研究[J].沈阳化工学院学报，1999，13（2）.87-9.
[3]董英杰，等.大果山楂叶黄酮成分研究[J].沈阳药科大学学报，1996，13（1）.31-3.
关键词：山楂叶；结构鉴定；核磁共振光谱；三萜
1 概述
山楂是蔷薇科植物山里红的干燥成熟果实。山楂中的黄酮、三萜类等物质具有助消化、降血脂、抗心肌缺血、强心、增强免疫功能、抗肿瘤等多种功效，越来越引起人们对山楂的重视。其化学成分主要有三萜和黄酮两大类。为开发山楂资源，我们对山楂叶乙醇提取物中的化学成分进行了初步研究，从中分离得到得到2个化合物，鉴定了它们的结构，分别为：齐墩果酸。
2 山楂的化学成分
2.1 黄酮类成分
目前，从山楂中分离得到60余种黄酮类化合物。其主要苷元为：芹菜素（Apigenin）、山奈酚类（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）、槲皮素类（Quercetin）及二氢黄酮类（Bi-hydroflavonoids）等。
2.2 黄烷及其聚合物
花青素（Anthocyanin）、无色花青素（Proanthocyanin）及儿茶精（Catechins）类广泛存在于山楂属植物中，它们多以单体或二聚体、多聚体形式存在。目前，分离得到的这类成分有：（1）矢车菊素（Cyanidin）；（2）（-）-表儿茶精[（-）-Epicatechin]；（3）（+）-儿茶精[（+）-Catechin]；（4）无色缔纹天竺；（5）缔纹天竺苷；（6）二聚无色矢车菊素及其他黄烷聚合物。
2.3 三萜类成分
山楂中的萜类成分包括：熊果酸（Ursolic acid）、齐墩果酸（Oleanolic acid）及山楂酸（Crataegolic acid）。
2.4 其它有机酸
草酸（Oxalic acid）、苹果酸（Malic acid）、柠檬酸（Citric acid）及其甲酯、绿原酸（Chlorogenic acid）、酒石酸（Tartaric acid）、棕榈酸（Palmitic acid）、硬脂酸（Stearic acid）、油酸（Oleic acid）、亚油酸（Linoleic acid）、亚麻酸（Linolenic acid）、琥珀酸（Succinic acid）等。
2.5 山楂中的微量元素及氨基酸
研究表明，中药中的微量元素常与有机酸、氨基酸、肽类等成分络合，产生协同作用而增强其疗效。近几年来，黄锁义等人对我国不同地区的山楂进行了微量元素的测定研究，结果表明，各种山楂中Ca、Fe、Mg、Cu、Zn、Mn等元素的含量较丰富，其中Ca的含量最高，Fe和Mg的含量也较高，其次是Cu、Zn、Mn。山楂中有害元素Pd、Cd、As的含量都小于1‰，远远低于国家限定范围。与山楂是无毒是相一致的。山楂中含有人体必需的微量元素Fe、Ca、Cr、Mn、Zn、Ni、Co，不同种的山楂其所含微量元素的含量略有差异。
3 实验部分
3.1 仪器与材料
3.1.1 仪器
北京泰克X-4显微熔点测定仪，Bruker ARX-300型核磁共振光仪，BSZ-2型自动双重纯水蒸馏器，岛津LC-10AT泵，EYELA旋转蒸发仪。
3.1.2 材料
薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂），聚酰胺（80～120目及200～300目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂），柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）， 所用试剂为分析纯。
山楂药材购于辽宁省药材公司。
3.2 提取分离
山楂叶（20 kg），用80%（？渍）乙醇水溶液加热回流提取3次，每次2 h。药液回收至无醇味后用大孔树脂处理，乙醇-水梯度洗脱，收集55%（？渍）乙醇水洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥得棕红色粉末。取50g提取物经聚酰胺（80～120目）柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，再经聚酰胺柱（200～300目）再次分离，得到该化合物。
3.3 结构鉴定
白色无定型粉末（甲醇），Liebermann-Burchard反应阳性。1H-NMR（600 MHz， MeOD）高场区可观察到7个甲基质子的信号δ1.14 （3H， s）， 0.99 （3H，s）， 0.93（3H， s）， 0.92（3H， s）， 0.90 （3H， s）， 0.77 （3H， s）， 0.76 （3H， s）提示化合物7为三萜类化合物，七个甲基均为单峰，故推测为齐墩果烷型的母核。另外观察到一个烯氢信号δ5.28（1H， t， J=3.4 Hz）和一个连氧碳上的质子信号δ3.21（1H， m）。 13C-NMR（150 MHz， MeOD）谱低场区可以观察到羧基碳信号δ182.6， 特征烯键碳信号δ143.6，122.7，连氧碳信号δ79.0。以上数据与参考文献对照基本一致，故鉴定该化合物为齐墩果酸。
3.4 结论
山楂叶（20 kg），用80%（？渍）乙醇水溶液加热回流提取3次，每次2 h。药液回收至无醇味后用大孔树脂处理，乙醇-水梯度洗脱，收集55%（？渍）乙醇水洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥得棕红色粉末。取50 g提取物经聚酰胺（80～120目）柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，再经聚酰胺柱（200～300目）再次分离，得到该化合物。
3.5 讨论
3.5.1 样品量与拌样硅胶量及柱层析硅胶的比例。通常样品量与拌样硅胶量的比例为1：1～1：2；样品量与柱层析硅胶量的比例为1：10～1：20。一般在进行样品粗分时，样品量与柱层析硅胶量的比例选择1：10即可，而在进行样品细分离时，样品量与柱层析硅胶量的比例可选择1：15～1：20。
3.5.2 在进行样品分离时，应先进行薄层预示，根据薄层板的结果来选择合适的洗脱剂，同时，柱层析的洗脱剂比例可以參考薄层预示结果。但通常柱层析的洗脱剂比例比薄层预示中的洗脱剂比例小。
参考文献
[1]Anon. Perf.： Monographs on floral odors V. Ⅱ. Heliotrope， Wallflower， Hawthorn， and the scent of the hayfields. Essent. Oil Record 1921，12，-389～91.
[2]张培成，等.山楂果化学成分的研究[J].沈阳化工学院学报，1999，13（2）.87-9.
[3]董英杰，等.大果山楂叶黄酮成分研究[J].沈阳药科大学学报，1996，13（1）.31-3.