【摘 要】
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目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233,Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到p
【机 构】
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暨南大学药学院基因组药物研究所,中山大学生命科学学院/广东省热带亚热带植物资源重点实验室
【基金项目】
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广东省自然科学基金项目(2017A030313561,2018A0303130253),广东省中医药局科研课题(20141065),广东省热带亚热带植物资源重点实验室开放课题(PlantKF10)。
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目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233,Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到p
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