【摘 要】
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为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK(+)载体3′-端
【机 构】
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福建省精密仪器农业测试重点公共实验室,福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心,厦门东渡出入境检验检疫局
【基金项目】
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福建省科技计划项目-省属公益类科研院所基本科研专项（2015R1025-1）,福建省农业科学院科技创新团队PI项目（2016P-18）
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为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK(+)载体3′-端进行加T反应后,使用T4DNA连接酶处理加T后pBS载体,使3′-端未加T平末端载体重新形成超螺旋状态,而3′-端加T载体则保持线性化状态,在琼脂糖电泳时切胶回收3 000bp处DNA片段,成为pBS-T载体。使用构建的pBS-T载体分别克隆500bp和1 000bp PCR片段,pBS-T载体克隆效率达到100%,实现了对PCR产物的零背景克隆。
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