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摘 要：本文针对测定复杂基质样品中痕量六六六、滴滴涕干扰大，难以准确定量的问题，通过采用几种方法加标回收率实验比较，确定了选用过固相萃取柱后再加硫酸进行酸化处理的样品前处理方法，平均加标回收率在90-115%之间，定量相对偏差不大于10%。
关键词：复杂基质；固相萃取（SPE）；酸化处理
1 六、七十年代大量使用的六六六、滴滴涕，由于其难降性，直至今日，还残留于土壤、大气、地表水中，对环境及生物圈产生着影响。现在六六六、滴滴涕在土壤中的含量基本处在μg/kg或μg/L水平。当前检测六六六、滴滴涕所用的方法主要是气相色谱法（附电子捕获检测器ECD），[1]由于ECD检测器灵敏度高，检出限低，对电负性越强的分子越是灵敏、响应值越大，这样在分析复杂基质样品时，由于内容物的增多，背景干扰变大，定性、定量显得特别麻烦，有时甚至造成误判，难以满足日常的检测需要。
本文结合国内外检测方法，研究并改进传统测试方法，提出了分析复杂基质样品中痕量六六六、滴滴涕的气相色谱（ECD）法。
2 材料与方法
2.1 材料与设备
Aglient6890N气相色谱仪（ECD）
高速匀浆机、氮吹仪、旋涡混合器、水浴锅。
丙酮、正已烷、石油醚、乙腈为HPLC级
α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p，p’-DDE、p，p’-DDD、o，p’-DDE、p，p’-DDE为农业部环境保护科研监测所研制的标准品，浓度为100ppm。
无水硫酸钠：分析纯
Florisil固相萃取柱（1g）：残留分析专用柱[2]
2.2 方法
分析柱：HP-5柱子 30m×0.25mm×0.25μm 程序升温进样口温度：250℃ 检测器温度：320℃ 氮气流量：
1.8ml/min ，不分流进样
柱温：150℃（保持2min）6℃/min 270℃（保持8min）。[3]
2.3 提取与净化
2.3.1 提取
准确称取均匀样品25.0克（干制品5.0克，加入20ml水浸泡半小时），加入50mL乙腈，高速匀浆2分钟。在100mL具塞量筒内放5.0克氯化钠，过滤匀浆好的样品，收集约40-50mL滤液，盖上盖子，剧烈震荡1分钟。在室温下静置至乙腈相和水相分层。准确吸取10.0mL乙腈相溶液（上层）于100mL烧杯中，80℃水浴蒸发加热，杯内缓缓通入氮气，蒸发近干；加入2mL正己烷溶解样品残渣。[4]
2.3.2 过柱
Florisil固相萃取柱（1g），用5mL10%丙酮/己烷（V/V）条件化，再加5mL己烷，当溶剂液面到达柱吸附表面时，立即将烧杯中用2mL己烷溶解的样品溶液加到已条件化的Florisil柱上，并用15mL离心管接受洗脱液。用5mL10%丙酮/己烷（V/ V）洗烧杯，当液面到达柱吸附层表面时，加到柱上洗脱。重复清洗，将15mL离心管收集的洗脱液放在氮吹仪上（水浴温度55℃）上，通氮气或空气，缓缓浓缩至4.0mL，用己烷准确定容至5.0mL。在旋涡混合器上混匀试管中溶液。
2.3.3 净化
加1.0mL浓硫酸于5.0mL样液中，剧烈振摇，待静止分层后，离心，吸出上清液于装有无水硫酸钠的具塞试管中，振摇后静止，取出上清液上机测试。
3 结果与讨论
3.1 溶剂的选择
选择不同的溶剂，提取的效果也不同。本实验在最终确定乙腈为提取剂前，设计采用丙酮、石油醚、丙酮-正己烷（1∶1）混合溶液、乙腈四种溶液作为提取剂，以加标回收率（在黄瓜样品中添加六六六）判断各提取液的提取效果。
实验证明，提取效果由好至差依次为：乙腈、丙酮-正己烷（1∶1）混合溶液、[6]石油醚、丙酮。而且以乙腈提取液最为清亮；丙酮提取液色素较多；石油醚易挥发、操作难度大，不受控；因此，本实验最终采用乙腈作为提取剂。
3.2 固相萃取影响分析
实验设计了经过Florisil固相萃取柱处理后再加硫酸和不经Florisil固相萃取柱处理直接加硫酸处理的效果比较。实验中挑选了洋葱、大蒜、大葱、韭菜、茶叶等11种样品进行过柱净化和硫酸净化相组合处理的效果比较，具体数据见表1。
从数据可知，过柱再加浓硫酸处理的效果明显优于其他两种。这种处理在国外很多方法中都没有提到。实验证明：硫酸能很好的去除由于过柱不充分或柱子不能去除的杂质、色素等，能更好的降低基质干扰，同时延长色谱柱的使用寿命，降低检测器的污染。
3.3 方法的精密度、添加回收率
用本法对菊花茶样品进行添加回收率实验，[10]添加水平为0.08μg/kg浓度，每个水平重复做8次。
回收率实验表明，该方法平均回收率在90-115%，变异系数（CV）在3.0-7.5之间，证明本方法准确性高、重现性好，抗干扰能力强，满足农残分析的要求。本方法研究为分析痕量的六六六、滴滴涕提供了一种新的检测途径。
4 结论
本方法通过大量实验，找出了一种快速、简捷、准确的分析痕量六六六、滴滴涕的气相色谱法。方法着重从提取溶剂的优化；同时引入固相萃取技术和浓硫酸净化处理技术，确定并优化样品前处理方法。实验证明，方法提升了定性、定量能力，平均加标回收率在90-115%之间，定量相对偏差不大于10%。
参考文献
[1] 中国国家标准化委员会 .GB/T5009.19-2003.食品中六六六、滴滴涕残留量的测定
[2] 陈家华.现代食品分析新技术.化学工业出版社，2005.18～19
[3] 钱索芬，周继红.毛细管程序升温气相色谱法测定水品中六六六、滴滴涕.理化检验：化学分册，2003，11：679～681
[4] 中华人民共和国农业部. NY/T761-2004.蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法
[5] 易军，张水坝.茶叶中多种农药残留的气相色谱法测定.自然科学报，2002，041：334～339
[6] 孔祥盈.气相色谱测定水产品中六六六和滴滴涕的残留.食品研究与开发，2005，2：138～141
[ 7 ] 周春宏，叶红.气相色谱测定茶叶中六六六、滴滴涕.化学时刊，2005，4：26～28
[8] 陈建民.中药中六六六、滴滴涕残留量的检测及标准的计论.中药研究与信息，2000（002）：18～20
[9] 中国国家标准化委员会.GB/T14551-2003.动、植物中中六六六、滴滴涕测定的气相色谱法
[10] 程雪梅.毛细管气相色谱法测定食品中六六六、滴滴涕农药残留.热带农业工程，2003，1：23～24
关键词：复杂基质；固相萃取（SPE）；酸化处理
1 六、七十年代大量使用的六六六、滴滴涕，由于其难降性，直至今日，还残留于土壤、大气、地表水中，对环境及生物圈产生着影响。现在六六六、滴滴涕在土壤中的含量基本处在μg/kg或μg/L水平。当前检测六六六、滴滴涕所用的方法主要是气相色谱法（附电子捕获检测器ECD），[1]由于ECD检测器灵敏度高，检出限低，对电负性越强的分子越是灵敏、响应值越大，这样在分析复杂基质样品时，由于内容物的增多，背景干扰变大，定性、定量显得特别麻烦，有时甚至造成误判，难以满足日常的检测需要。
本文结合国内外检测方法，研究并改进传统测试方法，提出了分析复杂基质样品中痕量六六六、滴滴涕的气相色谱（ECD）法。
2 材料与方法
2.1 材料与设备
Aglient6890N气相色谱仪（ECD）
高速匀浆机、氮吹仪、旋涡混合器、水浴锅。
丙酮、正已烷、石油醚、乙腈为HPLC级
α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p，p’-DDE、p，p’-DDD、o，p’-DDE、p，p’-DDE为农业部环境保护科研监测所研制的标准品，浓度为100ppm。
无水硫酸钠：分析纯
Florisil固相萃取柱（1g）：残留分析专用柱[2]
2.2 方法
分析柱：HP-5柱子 30m×0.25mm×0.25μm 程序升温进样口温度：250℃ 检测器温度：320℃ 氮气流量：
1.8ml/min ，不分流进样
柱温：150℃（保持2min）6℃/min 270℃（保持8min）。[3]
2.3 提取与净化
2.3.1 提取
准确称取均匀样品25.0克（干制品5.0克，加入20ml水浸泡半小时），加入50mL乙腈，高速匀浆2分钟。在100mL具塞量筒内放5.0克氯化钠，过滤匀浆好的样品，收集约40-50mL滤液，盖上盖子，剧烈震荡1分钟。在室温下静置至乙腈相和水相分层。准确吸取10.0mL乙腈相溶液（上层）于100mL烧杯中，80℃水浴蒸发加热，杯内缓缓通入氮气，蒸发近干；加入2mL正己烷溶解样品残渣。[4]
2.3.2 过柱
Florisil固相萃取柱（1g），用5mL10%丙酮/己烷（V/V）条件化，再加5mL己烷，当溶剂液面到达柱吸附表面时，立即将烧杯中用2mL己烷溶解的样品溶液加到已条件化的Florisil柱上，并用15mL离心管接受洗脱液。用5mL10%丙酮/己烷（V/ V）洗烧杯，当液面到达柱吸附层表面时，加到柱上洗脱。重复清洗，将15mL离心管收集的洗脱液放在氮吹仪上（水浴温度55℃）上，通氮气或空气，缓缓浓缩至4.0mL，用己烷准确定容至5.0mL。在旋涡混合器上混匀试管中溶液。
2.3.3 净化
加1.0mL浓硫酸于5.0mL样液中，剧烈振摇，待静止分层后，离心，吸出上清液于装有无水硫酸钠的具塞试管中，振摇后静止，取出上清液上机测试。
3 结果与讨论
3.1 溶剂的选择
选择不同的溶剂，提取的效果也不同。本实验在最终确定乙腈为提取剂前，设计采用丙酮、石油醚、丙酮-正己烷（1∶1）混合溶液、乙腈四种溶液作为提取剂，以加标回收率（在黄瓜样品中添加六六六）判断各提取液的提取效果。
实验证明，提取效果由好至差依次为：乙腈、丙酮-正己烷（1∶1）混合溶液、[6]石油醚、丙酮。而且以乙腈提取液最为清亮；丙酮提取液色素较多；石油醚易挥发、操作难度大，不受控；因此，本实验最终采用乙腈作为提取剂。
3.2 固相萃取影响分析
实验设计了经过Florisil固相萃取柱处理后再加硫酸和不经Florisil固相萃取柱处理直接加硫酸处理的效果比较。实验中挑选了洋葱、大蒜、大葱、韭菜、茶叶等11种样品进行过柱净化和硫酸净化相组合处理的效果比较，具体数据见表1。
从数据可知，过柱再加浓硫酸处理的效果明显优于其他两种。这种处理在国外很多方法中都没有提到。实验证明：硫酸能很好的去除由于过柱不充分或柱子不能去除的杂质、色素等，能更好的降低基质干扰，同时延长色谱柱的使用寿命，降低检测器的污染。
3.3 方法的精密度、添加回收率
用本法对菊花茶样品进行添加回收率实验，[10]添加水平为0.08μg/kg浓度，每个水平重复做8次。
回收率实验表明，该方法平均回收率在90-115%，变异系数（CV）在3.0-7.5之间，证明本方法准确性高、重现性好，抗干扰能力强，满足农残分析的要求。本方法研究为分析痕量的六六六、滴滴涕提供了一种新的检测途径。
4 结论
本方法通过大量实验，找出了一种快速、简捷、准确的分析痕量六六六、滴滴涕的气相色谱法。方法着重从提取溶剂的优化；同时引入固相萃取技术和浓硫酸净化处理技术，确定并优化样品前处理方法。实验证明，方法提升了定性、定量能力，平均加标回收率在90-115%之间，定量相对偏差不大于10%。
参考文献
[1] 中国国家标准化委员会 .GB/T5009.19-2003.食品中六六六、滴滴涕残留量的测定
[2] 陈家华.现代食品分析新技术.化学工业出版社，2005.18～19
[3] 钱索芬，周继红.毛细管程序升温气相色谱法测定水品中六六六、滴滴涕.理化检验：化学分册，2003，11：679～681
[4] 中华人民共和国农业部. NY/T761-2004.蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法
[5] 易军，张水坝.茶叶中多种农药残留的气相色谱法测定.自然科学报，2002，041：334～339
[6] 孔祥盈.气相色谱测定水产品中六六六和滴滴涕的残留.食品研究与开发，2005，2：138～141
[ 7 ] 周春宏，叶红.气相色谱测定茶叶中六六六、滴滴涕.化学时刊，2005，4：26～28
[8] 陈建民.中药中六六六、滴滴涕残留量的检测及标准的计论.中药研究与信息，2000（002）：18～20
[9] 中国国家标准化委员会.GB/T14551-2003.动、植物中中六六六、滴滴涕测定的气相色谱法
[10] 程雪梅.毛细管气相色谱法测定食品中六六六、滴滴涕农药残留.热带农业工程，2003，1：23～24