人肺癌相关基因HLCDG1在大肠杆菌中的表达

来源 :中国医师杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanfeng_wang
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目的 构建新克隆的肺癌抑瘤基因候选者HLCDG1的融合表达质粒pGEX-6P-1/ HLCDG1并在原核表达系统中表达.方法采用多聚酶链式反应(PCR)扩增HLCDG1基因蛋白编码序列,将该片断插入原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL-21扩增.构建的融合表达质粒经酶切和测序鉴定后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色和Western blot鉴定实验结果.结果构建的融合表达质粒酶切和测序鉴定阅读框架正确,导入大肠杆菌中经IPTG诱导出一条分子量约为46kD的新蛋白带,主要存在于细菌沉淀中,Western blot鉴定其为GST-HLCDG1融合蛋白.结论 HLCDG1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中有效表达,为进一步研究该蛋白质的结构和功能奠定研究基础。

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