【摘 要】
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目的观察脑源性神经营养因子前体(proBDNF)对培养的小鼠小脑颗粒细胞(CGCs)的增殖和凋亡的影响,探讨p75神经营养因子受体(p75NTR)和VPS10P-结构域家族成员sortilin的介导机制
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科,
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目的观察脑源性神经营养因子前体(proBDNF)对培养的小鼠小脑颗粒细胞(CGCs)的增殖和凋亡的影响,探讨p75神经营养因子受体(p75NTR)和VPS10P-结构域家族成员sortilin的介导机制。方法采用出生后7 d(P7)的129SV转基因小鼠(p75NTR+/+和p75NTR-/-)进行CGCs的原代培养。分为BSA组(10 ng/mL)、proBDNF干预组(10 ng/mL)和proBDNF(10 ng/mL)+sortilin-Fc(20 ng/mL)干预组。免疫荧光染色法观察p75NTR和sortilin在培养细胞的表达,BrdU标记阳性增殖细胞以及TUNEL法检测凋亡细胞。结果成功培养出高纯度的原代小脑颗粒细胞。免疫荧光显示p75NTR和sortilin共同表达于野生型小鼠培养的小脑神经元胞膜和突起上。给予proBDNF干预后,p75NTR+/+型CGCs的BrdU阳性细胞比例较对照组明显减少(P<0.01),而TUNEL阳性细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),且这两种效应都可被sortilin-Fc竞争性抑制并中和;p75NTR-/-型CGCs中各组之间BrdU阳性细胞以及TUNEL阳性细胞比例均无显著性差异(P>0.05)。结论 proBDNF可能通过与p75NTR、sortilin结合形成功能三聚体抑制神经细胞的增殖、促进细胞凋亡,proBDNF具有神经毒性作用。
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