【摘 要】
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目的 构建并鉴定含肺表面活性蛋白D(SP-D)基因的重组真核表达质粒.方法 提取A549细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增含SP-D基因的cDNA,将产物克隆进真核载体pGEFP-N1内,构建
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院儿科, 江苏省,210029
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目的 构建并鉴定含肺表面活性蛋白D(SP-D)基因的重组真核表达质粒.方法 提取A549细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增含SP-D基因的cDNA,将产物克隆进真核载体pGEFP-N1内,构建含SP-D基因的重组真核表达质粒.将pGEFP-N1-SP-D重组质粒和pGEFP-N1空载体分别转染293T细胞,Western blot法检测SP-D的蛋白表达.结果 双酶切鉴定及核酸序列分析证实,SP-D已成功插入真核载体pGEFP-N1内.转染pGEFP-N1-SP-D的293T细胞中检测到高表达的SP-D蛋白.结论 成功构建含SP-D基因的重组真核表达质粒,并能在293T细胞中高表达.
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