【摘 要】
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目的克隆与结核分支杆菌耐异烟肼密切相关的KatG基因，实现其在大肠杆菌中的表达并对其酶活性进行初步检测。方法构建含KatG基因的表达质粒pET24b-KatG，转化大肠杆菌BL21(DE3)菌
【机 构】
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上海医科大学华山医院传染病科,复旦大学遗传学研究所
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目的克隆与结核分支杆菌耐异烟肼密切相关的KatG基因，实现其在大肠杆菌中的表达并对其酶活性进行初步检测。方法构建含KatG基因的表达质粒pET24b-KatG，转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，获得稳定的高表达菌株后对表达产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果限制性内切酶分析结果显示所构建的pET24b-KatG表达质粒已成功克隆了KatG基因。含pET24b-KatG表达质粒的大肠杆菌在导丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达，对表达产物进行SDS-PAGE，发现KatG表达产物相对分子质量约为80×103，表达产物约占总蛋白量的17.7%。表达产物检测具有过氧化氢酶活性。结论克隆并在工程菌中表达了异烟肼耐药密切相关的KatG基因，表达产物具备过氧化氢酶活性。可藉此方法研究结核分支杆菌的耐药机制。
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