【摘 要】
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以健康未经免疫的斑点叉尾鲴为试验材料,取其新鲜外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA.PCR扩增重链Fd和轻链cDNA,以纯化的VH、VL基因为模板,以与VH基因3-端和VL基
【机 构】
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华中农业大学水产学院,武汉,430070;中国水产科学研究院长江水产研究所,武汉,430223;
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以健康未经免疫的斑点叉尾鲴为试验材料,取其新鲜外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA.PCR扩增重链Fd和轻链cDNA,以纯化的VH、VL基因为模板,以与VH基因3-端和VL基因-5端序列互补的Linker-Primer Mix为引物,将VH、VL随机拼接为ScFv.通过酶切连接,依次将PCR产物插入质粒p3MH相应位点,热激法转化大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM 13,构建噬菌体单链抗体库.测定库容并酶切鉴定.斑点叉尾鲴天然单链(ScFv)噬菌体抗体库成功构建为进一步筛选特异性抗体及从斑点叉尾鲴病变组织中提取特异性抗原用于免疫治疗奠定了基础.
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