【摘 要】
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V型三磷酸腺苷酶(ATP酶)是真核生物调节胞质内细胞器酸碱度的核心元件,对盐等胁迫环境下细胞膜的稳定起着重要作用。VPH1是V型ATP酶蛋白复合物膜上的1个亚基蛋白,其跨膜结构
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(21375062)
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V型三磷酸腺苷酶(ATP酶)是真核生物调节胞质内细胞器酸碱度的核心元件,对盐等胁迫环境下细胞膜的稳定起着重要作用。VPH1是V型ATP酶蛋白复合物膜上的1个亚基蛋白,其跨膜结构对V型ATP酶的功能有很大影响。本研究利用PCR(Polymerase chain reaction)介导的同源重组技术,构建毕赤酵母内源VPH1 C端的定点融合FLAG标签,筛选重组菌株进行培养,分离出目的蛋白,去污剂溶解后通过FLAG亲和纯化获得VPH1蛋白,为其后续结构的研究奠定基础。说明,PCR介导的同源重组技术能快速筛选到毕赤酵母重组转化子,FLAG标签添加到VPH1的C端可以成功纯化出目的蛋白。同时本研究所用的载体和研究思路也可以用于其他感兴趣膜蛋白的重组纯化。
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