背景:在前期DNA重组技术构建端粒酶反转录酶基因真核表达的质粒、端粒酶反转录酶基因基因转染大鼠胰岛素分泌细胞的基础上,得到永生化的胰岛素分泌细胞系,建立了稳定一致的细胞模型。目的:端粒酶转染健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,建立均一稳定的胰岛素分泌细胞系,为临床胰岛素分泌细胞移植治疗糖尿病奠定实验基础。设计、时间及单位:动物实验观察,2007-02/05在辽宁医学院人类学研究所完成。材料:健康成年SD大鼠20只,取其胰岛细胞的分离、纯化、培养及鉴定。方法:原代培养健康成年SD大鼠的胰岛素分泌细胞,采用Ⅴ型胶原酶消化和Ficoll400纯化液纯化。经双硫腙染色和高效液相色谱分离及质谱分析的方法对分离得到的胰岛素分泌细胞进行检测。采用含有端粒酶反转录酶基因的载体转染大鼠胰岛素分泌细胞,经G418筛选后得到阳性细胞克隆,并在体外进行连续的传代培养。应用RT-PCR方法检测hTERT基因在细胞中的整合和表达情况,同时用高效液相色谱分离法对转染后的细胞分泌胰岛素的功能进行检测。主要观察指标:①胰岛细胞在经过端粒酶反转录酶基因转染前后的细胞生长情况。②转染后的细胞在体外的传代培养情况。③细胞的胰岛素分泌情况。结果:端粒酶反转录酶基因转染后细胞与未转染的细胞对比活力良好并且仍有分泌胰岛素的功能,可在体外连续的进行传代培养(目前已传至第15代,仍在进一步传代培养中),同时外源性的hTERT基因在转染后的胰岛素分泌细胞中有稳定的整合并表达。结论:转染后的细胞具有分泌胰岛素的功能并可以在体外连续传代培养,端粒酶反转录酶基因在胰岛素分泌细胞中稳定的整合并表达,胰岛素分泌细胞的永生化细胞系基本建立。