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本文基于双螺旋点扩散函数方法，建立了具有高定位精度的三维多粒子追踪成像系统，成像深度达到4 pm，利用荧光珠进行标准实验，通过探测探针在甘油-水溶液中的均方位移曲线得到了粒子扩散系数。最后利用本系统实现了对喉癌（HEP-2)细胞内多个荧光微球的动态追踪.通过数据分析得到细胞内荧光微球的移动量以及运动速率，为研究活细胞内分子转运和相互关系提供了非常有用的工具.